高压氧对失血性休克复苏后炎症反应的影响

摘要

目的:失血性休克是临床常见的危重症之一，许多因素包括缺血、缺氧、再灌注损伤参与了其病理过程。活性氧和氮氧自由基的过度产生可触发全身炎症反应综合症，过度的全身性炎症是失血性休克由可逆向不可逆转化的重要原因之一，与休克的预后有明显关系。因此，在失血性休克的早期，除进行积极的液体复苏外，采取抗炎治疗措施，阻断或减少炎性介质的生成和释放，对于阻止失血性休克的病程发展有重要意义。高压氧已经被证明能减轻局部如骨胳肌[1，2]小肠[3]，皮瓣[4]，肝[5]，以及一氧化碳中毒[6]后缺血再灌注损伤，有研究表明高压氧可减轻脂多糖(LPS)[7]或酵母多糖(zymosan)[8]诱发感染性休克时的炎症反应，国外有研究表明高压氧可以减轻失血后肝脏肿瘤坏死因子-αmRNA(TNF-αmRNA)和血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)水平以及肝白细胞介-6mRNA(IL-6mRNA)和血浆白细胞介素-6(IL-6)水平[9]。而对于失血性休克引起的全身炎症反应甚至多器官功能障碍的高压氧治疗很少有报导。本研究目的在建立大鼠失血性休克复苏模型过程中应用高压氧治疗，以观察高压氧对失血性休克复苏后炎症反应的影响，同时探讨其机制。 研究对象与方法:1.动物分组：Wistar大鼠随机分为三组，每组24只大鼠。对照组：只进行手术操作，不放血诱导休克；休克组：诱导休克并进行常规补血、补液复苏。复苏后立即拔除插管、结扎血管、闭合伤口。高压氧组：诱导休克并进行常规补血、补液复苏，复苏后立即拔除插管、结扎血管、闭合伤口。立即送入高压氧舱，先以纯氧洗舱保持10分钟内压力为0.2Mpa，氧浓度大于99.5％停留40分钟。其间换气10分钟，减压15分钟出舱。送入氧舱约1小时。 2.失血性休克复苏动物模型制备[10] Wistar大鼠，体重260-300g。中国医科大学实验动物中心提供，雌雄不限，速眠新(0.4ml/kg)在25℃室温下腹腔内给药麻醉，右股动脉插入套管针(Intima24GA)，连接多导生理记录仪(POLYGRAPHRM6000，日本)，监测血压；左颈静脉插入套管针(Intima22GA)保留为复苏通路，右颈动脉插入套管针(Intima22GA)，另一端连接肝素化玻璃注射器中，进行放血诱导休克，在5min内使血压下降并维持平均动脉压30～35mmHg。通过输、抽少量血维持低血压状态55min。低血压60min后，用60％自体血量给大鼠进行复苏5min，同时用两倍血量的生理盐水通过微量输液泵进行补充55min。 3.指标检测 麻醉后计0小时，2.5小时时诱导休克(对照组不诱导，仅暴露并分离上述三处血管)，3.5小时时开始复苏(对照组不复苏)，4.5小时时复苏结束，每组动物根据2.5小时、3.5小时、4.5小时、24小时，分成四个亚组(n=6)。大鼠分别按以上四个时点采血2毫升后处死，其中50μl加入5ml生理盐水中离心去上清留取底部红细胞。其余离心后取血浆。放免法检测外周血肿瘤坏死因子(TNF-α)，TNF-α放射免疫药盒购于北京科美东雅生物技术有限公司。比色法检测诱生性一氧化氮合成酶(iNOS)，iNOS测试盒购于南京建成生物工程研究所。羟胺法检测大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)。SOD测试盒购于南京建成生物工程研究所。 4.病理学检查 三组动物在24小时后活杀取材，留取肝脏左叶、小肠、肺。石蜡包埋，切片，经HE染色常规病理学光镜检查，24小时处死的大鼠所取得的肠[11]、肺[12]、肝[13]组织分别进行损伤评分。 5.统计学分析 用SPSS11.5ForWindows软件处理数据。数据以均数±标准误((-x)±s(-x))表示，采用单因素ANOVA(analysisofvariance)检验，独立样本间比较采用posthoc(SNK)检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 结果:1.血红细胞SOD含量变化 2.5小时，3.5小时三组动物血红细胞中SOD含量差异无统计学意义。4.5小时高压氧组与休克组动物血红细胞SOD含量差异无显著性。对照组与高压氧组和休克组相比差异具有显著性(P＜0.05)。24小时高压氧组血红细胞SOD值高于休克组，休克组血红细胞SOD值低于假休克组，高压氧组血红细胞SOD值高于假休克组，差异均具有显著性(P＜0.05)。 2.血浆iNOS含量变化 2.5小时，3.5小时三组动物血浆iNOS含量差异无统计学意义。4.5小时高压氧组与休克组动物血浆iNOS含量差异无显著性。对照组与高压氧组和休克组相比差异具有显著性(P＜0.05)。24小时高压氧组血浆iN-OS值低于休克组，休克组血浆iNOS值高于对照组，高压氧组血浆iNOS值低于对照组，差异均具有显著性(P＜0.05)。 3.血浆TNF-α含量变化 2.5小时，3.5小时三组动物血浆TNF-α含量差异无统计学意义。4.5小时高压氧组与休克组动物血浆TNF-α含量差异无显著性。对照组与高压氧组和休克组相比差异具有显著性(P＜0.05)。24小时高压氧组血浆TNF-α值低于休克组，高压氧组血浆TNF-α值低于对照组，休克组血浆TNF-α值高于对照组，差异均具有显著性(P＜0.05)。 4.病理损伤评分： 24小时处死的大鼠所取得的肠、肺、肝组织分别进行损伤评分，肠损伤按照Park’s肠损伤评分标准[11]进行评分，肺损伤按照Nishina肺损伤评分标准[12]进行评分，肝损伤评分按照Schimdt肝损伤评分标准[13]进行评分。24小时休克组大鼠肠、肝、肺病理损伤明显，高压氧显著减轻了大鼠肠、肝、肺组织的水肿、出血、及炎性细胞浸润。差异均具有显著性(P＜0.05)。 结论:本研究中大白鼠失血性休克液体复苏后应用高压氧治疗，改善了组织细胞的氧供，增强了肌体清除活性氧和自由基的能力，减轻了组织细胞的水肿及炎性细胞渗出，改善了微循环障碍，减轻了失血性休克复苏后的炎症反应细胞因子的释放，减轻了失血性休克复苏后的炎症反应。

目录

中国医科大学研究生学位论文独创性声明及版权使用授权书

中文论著摘要

英文论著摘要

英文缩略语

前 言

实验材料与方法

实验结果

讨 论

结 论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 失血性休克及复苏后的炎症反应综合症发生机制

致 谢

个人简介