人血浆中二苯乙烯类化合物HPLC-MS/MS检测方法的基质效应及其解决方案

摘要

目的：高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS/MS)，以其灵敏度高、定量准的优势，一直作为生物样品痕量分析的主要手段，特别是上世纪90年代，大气压离子化(atmospheric pressure ionization，API)等接口的发明，使之在定量检测这一领域应用更加广泛。特别是在生物检测等方面但是生物样品在进行检测的时候，经常会出现离子信号抑制或者提高的现象，这种显现被称为基质效应，是因为在色谱分离时共洗脱的内源性物质影响了离子化信号的准确性。
　　 二苯乙烯类化合物就有较强的药理活性及研究价值。在本实验以八种二苯乙烯类化合物为研究对象，对基质效应进行了定量的测定，检测了不同萃取剂:甲基叔丁基醚、乙醚、乙酸乙酯;不同酸碱条件:pH=4.01、5.00、6.86、8.00、9.18时的基质效应的大小。从而找出一种最优的萃取条件。
　　 方法：
　　 本实验采用液-液萃取的方法，使用甲基叔丁基醚、乙醚、乙酸乙酯三种常用的萃取剂，分别在pH=4.01、5.0、6.86、8.00、9.18五种不同的pH条件下进行萃取八种二苯乙烯类化合物。
　　 采用HPLC-MS/MS方法进行检测，液相色谱系统为Agilent1200型高效液相色谱系统，MS/MS系统为AB SCIEX QTRAP5500型三重四级杆串联质谱仪，数据采集系统为Analyst1.5.1软件。色谱柱为Ultra C18柱(粒径5.0μm，150mm×2.1 mm I.D)，预柱为HYPERSIL GOLD（粒径3μm，10×2.1mmI.D），流动相成分为乙腈、水、甲酸铵。
　　 基质效应定量采用提取后添加的方法。
　　 使用Excel进行数据分析，使用Excel与Original8.0进行绘图。
　　 结果：
　　 根据上述实验条件，八种物质在三种不同的萃取剂的条件下，在碱性条件萃取的基质效应较小(-15＜MF＜15)，在pH=8.00时，基质效应最小。但是在乙酸乙酯为萃取剂情况下，白藜芦醇三甲醚与三乙酰化白藜芦醇的离子抑制效果明显，且不受酸碱度影响。本实验成功同时分离八种二苯乙烯类化合物。
　　 结论：
　　 实验结果表明，酸碱度可以影响二苯乙烯类化合物的基质效应，在碱性条件下萃取的时候，基质效应明显减小，达到可以进行生物实验的标准。基质效应与磷脂相关。

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