樟芝菌丝体发酵与富硒工艺条件研究

摘要

樟芝是台湾特有的药用真菌,具有抗氧化、抗肿瘤等多种功效,野生资源十分缺乏。本文主要研究内容及结果如下:
　　 分别以生物量、三萜产量和多糖产量为指标对樟芝液态发酵的培养基进行优化,并通过单因素实验和响应面分析法得到发酵最优培养条件。得到以生物量为目标产物的培养基组分为:葡萄糖6.76％,酵母粉0.67％,KH2PO40.1％,MgSO4·7H2O0.05％,VB110mg／100mL；培养条件是:温度28.58℃,pH2,接种量15％,装液量140mL／250mL,转速150rpm,发酵时间8.43d；发酵得到樟芝生物量达到6.78g／L。以三萜产量为目标产物的培养基组分为:麦芽糖4.57％,酵母粉0.45％,KH2PO40.08％,MgSO4·7H2O0.05％,VB110mg／100mL；培养条件是:温度24.94℃,pH6,接种量12％,装液量113.69mL／250mL,转速150rpm,发酵时间8.98d；发酵得到樟芝三萜达到82.33mg／L。以多糖产量为目标产物的培养基组分为:可溶性淀粉3.17％,麸皮0.79％,KH2PO40.1％,MgSO4·7H2O0.05％,VB110mg／100mL;培养条件是:温度26.8℃,pH2,接种量12％,装液量110.24mL／250mL,转速150rpm,发酵时间8.4d;发酵得到樟芝多糖达到183.46 mg／L。
　　 对樟芝富硒发酵工艺进行了研究,考察了亚硒酸钠添加量对樟芝富硒率和樟芝生长、代谢的影响,最终选择亚硒酸钠的添加浓度20μg／g。采用Plackett-Burman法和响应面分析法对樟芝液态富硒发酵培养基进行优化,得到最优富硒发酵培养基组成为:葡萄糖2.43％,可溶性淀粉2.34％,麸皮0.8％,KH2PO40.1％,MgSO4·7H2O0.05％,VB173.17mg／L;通过单因素实验得到富硒发酵最优条件:发酵温度在28℃,pH为6,接种量10％,装液量为100mL／250mL,转速为180rpm,发酵时间9d；富硒樟芝发酵的富硒率达到富硒率达到58.65％,富硒量达到856.676μg／g,生物量为3.4g／L。
　　 本文还建立了HPLC法测定樟芝中腺苷含量的方法,测定条件为C18色谱柱；流动相为甲醇:水=17:83;流速为0.8mL／min;柱温为30℃,紫外检测器检测,波长为260nm,结果显示腺苷在3.9062-125μg／mL内呈良好的线性关系(R2=0.9997),加样回收率为95.35％,RSD=1.07％。实验结果表明该方法可靠、简便、重现性好。此方法测得樟芝中腺苷含量约在0.496-0.847mg／g。