诺氟沙星模拟表位的淘选、应用及针对小分子噬菌体随机肽库的建立

摘要

诺氟沙星为氟喹诺酮类药物,过度服用会造成细菌的耐药性。本研究以抗NFLX单抗为靶分子,采用噬菌体展示技术淘选到了NFLX模拟表位,并建立了基于NFLX模拟表位建立起了Phage-ELISA和Phage-CLEIA这两种免疫学检测方法。同时构建了一个噬菌体随机环七肽库用于小分子模拟表位的淘选。
　　1、NFLX模拟表位淘选、鉴定及测序
　　以抗NFLX单抗为靶分子,从噬菌体环七肽库和十二肽库中淘选得到了NFLX模拟表位,经测序后得到12种序列: NKLRLPF、TPSRLPF、KFGFEPF、TWKNLPF、PIHRAPF、NTARWPF、SPLRAPF、NWSRLPF、GPLYPGPFHTSH、ADWHQKFQMHSR、SRMGPENWDKWY、DHAYWPKFWGKA,其中从环七肽库中淘选的模拟表位的共有序列为X-X-X-X-X-P-F,X为任意氨基酸。
　　2、基于NFLX模拟表位的Phage-ELISA分析法的建立
　　以H3噬菌体粒子建立NFLXPhage-ELISA,方法的IC50值为56.1ng/mL,线性检测范围为10.0~400.0ng/mL,批内变异系数(coefficient variations of intra-assay and inter-assay)为5.7％,批间变异系数(coefficient variation of inter-assay)为7.3%。加标浓度为300、600、1000μg/kg,回收率范围为70.4~120.3%,变异系数为6.9~9.3%。
　　3、基于NFLX模拟表位的Phage-CLEIA分析法的建立
　　以H3噬菌体粒子建立NFLX Phage-CLEIA,IC50值为41.7ng/mL,线性检测范围为5.0~400.0ng/mL。批内变异系数(coefficient variations of intra-assay and inter-assay)7.2%,批间变异系数(coefficient variation of inter-assay)为9.8%。加标浓度为300、600、1000μg/kg,回收率范围为74.0~118.0%,变异系数为9.8~11.2%。
　　4、噬菌体随机环七肽库的构建与鉴定
　　成功构建噬菌体随机环七肽库,经鉴定,该噬菌体随机肽库的库容量为2×107,基本满足淘选要求。此外,对所构建的随机肽库进行鉴定,得出其展示的多肽中氨基酸的实际观察频数与预期的频数基本相似,表明在随机肽库中氨基酸组成上具有随机性。

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第 1 章 综述

1.1 诺氟沙星及其分析检测方法研究进展

1.2 噬菌体展示技术的应用进展

第 2 章 诺氟沙星模拟表位的淘选、鉴定

2.1 实验试剂与仪器设备

2.2 实验方法与步骤

2.3 实验结果

2.4 小结

第 3 章 基于诺氟沙星模拟表位（H3 噬菌体）的 Phage-ELISA 的建立

3.1 实验试剂与仪器设备

3.2 实验方法与步骤

3.3 实验结果

3.4 小结

第 4 章 基于诺氟沙星模拟表位（H3 噬菌体）的 Phage-CLEIA 的建立

4.1 实验试剂与仪器设备

4.2 实验方法与步骤

4.3 实验结果

4.4 小结

第 5 章 针对小分子噬菌体随机环七肽库的构建与鉴定

5.1 实验试剂与仪器设备

5.2 实验方法与步骤

5.3 实验结果

5.4 小结

第 6 章 讨论与小结

6.1 讨论

6.2 小结

致谢

参考文献

攻读硕士期间的研究成果