基因Ⅶd亚型新城疫病毒感染La Sota疫苗免疫鸡引起的免疫器官损伤及其对疫苗免疫效果的影响

摘要

基因Ⅶd亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)是亚洲和非洲很多国家和地区的优势流行株。传统疫苗(La Sota)虽然能降低死亡率和发病率，但免疫鸡群中仍有基因Ⅶd亚型NDV的感染，且病毒仍可对免疫器官造成病理损伤。目前为止，免疫鸡群感染Ⅶd亚型NDV后免疫器官产生损伤的生物学效应机制还不明确。本研究首先用基因Ⅶd皿型NDV JS5/05株和早期基因Ⅸ型NDV F48E8两株强毒株进行免疫鸡体内感染试验，比较了病毒在鸡主要免疫器官中的复制能力及其引起的病理变化、T淋巴细胞亚群比例变化和细胞因子应答情况。其次，为了评价免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV后免疫器官损伤对免疫应答的影响，我们在基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株感染免疫鸡后，分别接种了AI灭活疫苗及IBD弱毒疫苗，并在疫苗接种后定期检测血清中特异性抗体水平，比较了试验组与对照组之间的抗体效价的差异。
　　1、La Sota疫苗免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV产生免疫器官损伤的机制
　　本研究用基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株和基因Ⅸ型NDV F48E8株分别感染La Sota疫苗免疫鸡，于感染后第3，5和7天采集肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊及十二指肠，比较了病毒在组织中引起的病理变化及病毒复制情况。我们发现两株病毒感染免疫鸡后对免疫器官的损伤存在显著差异。基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株感染对免疫器官的损伤表现为脾脏肿大和胸腺出血等病变，组织病理学结果显示脾脏及胸腺中淋巴细胞变性坏死，动脉周围淋巴鞘淋巴细胞减少，法氏囊有少量异嗜性粒细胞浸润;而F48E8感染后免疫器官没有明显的眼观病变。病毒载量测定结果显示，感染后第5天，JS5/05株在脾脏、胸腺及法氏囊中的复制水平高于F48E8株，其中两株病毒在脾脏和胸腺中的含量存在显著差异（P＜0.05）。流式细胞术检测T淋巴细胞亚群比例结果显示，JS5/05株感染后7天脾脏及胸腺中CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值显著低于F48E8组（P＜0.05），而CD8+T淋巴细胞水平显著高于F48E8组(P＜0.05)。细胞因子测定结果显示，在感染后第3，5及7天时，JS5/05株诱导的IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IFN-β、IFN-γ和LITAF的表达水平均显著高于F48E8感染组（P＜0.05）。说明基因Ⅶd亚型NDV在免疫器官中的高效复制，刺激产生过激的先天性免疫应答和炎症反应，结果共同造成了免疫器官中严重的病理损伤。
　　2、基因Ⅶd亚型NDV感染La Sota疫苗免疫鸡后对疫苗免疫效果的影响
　　为了评价La Sota疫苗免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV后免疫器官损伤对免疫应答的影响，本研究以基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株攻击免疫鸡后5天，分别接种禽流感(Avianinfluenza，AI)灭活疫苗及传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)弱毒疫苗作为试验组，同时分别设AI或IBD疫苗免疫组作为对照组。免疫后定期采血，测定试验鸡血清中的抗体水平，以血凝抑制试验(hemagglutination inhibition，HI)检测血清中AI的抗体滴度;以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中IBD的抗体滴度。结果显示，免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株后，灭活疫苗和弱毒疫苗产生的抗体水平均显著低于相应的免疫对照组。试验组AI抗体滴度在整个试验期明显低于免疫对照组，免疫后2周试验组与免疫对照组的结果分别为6.75±0.96log2和5.50±0.58log2，差异显著(P＜0.05)。试验组IBD抗体滴度在免疫后1，2和3周时分别为459.03±1036.04、5133.13±1071.97、3868.62±960.95，而免疫对照组的结果分别为2015.91±1792.24、7547.81±1012.38、7137.09±1526.90，两组在免疫后1周存在显著差异（P＜0.05），在免疫后2及3周时差异极显著(P＜0.01)。以上结果显示，免疫鸡群感染基因Ⅶd亚型NDV后，可引起免疫抑制效应，对后续疫苗免疫效果产生影响，且这种抑制作用对于弱毒疫苗更为明显。

目录

摘要

符号说明

第一章 文献综述

1 新城疫及新城疫病毒概述

1．1 新城疫及新城疫病毒

1．2 新城疫病毒的致病性

1．3 新城疫病毒流行历史及我国流行现状

1．4 基因Ⅶ型NDV对鸡的致病性研究进展

2 家禽对新城疫病毒的免疫应答

2．1 家禽对NDV的天然免疫应答

2．2 家禽对NDV的体液免疫应答

2．3 家禽对NDV的细胞免疫应答

参考文献

第二章 La Sota疫苗免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV产生免疫器官损伤的机制

1 材料

1．1 疫苗与毒株

1．2 鸡胚及试验动物

1．3 主要试剂与仪器

2 方法

2．1 疫苗的制备

2．2 试验鸡的免疫及分组

2．3 攻毒株滴度测定

2．4 免疫鸡攻毒

2．5 脏器病毒载量测定及病理切片制备

2．6 免疫器官T细胞亚群比例及细胞因子基因表达检测

3 结果

3．1 临床症状及大体病理变化

3．2 组织病理学变化

3．3 qRT-PCR技术检测脏器中病毒含量

3．4 流式细胞术检测免疫器官T淋巴细胞亚群比例

3．5 qRT-PCR技术检测免疫器官中相关细胞因子表达

4 讨论

参考文献

第三章 基因Ⅶd亚型NDV感染La Sota疫苗免疫鸡后对疫苗免疫效果的影响

1 材料

1．1 病毒

1．2 疫苗

1．3 试验动物

1．4 主要试剂

1．5 主要仪器

2 方法

2．1 试验鸡的免疫及分组

2．2 血清的制备

2．3 HI试验检测血清中AI抗体

2．4 ELISA检测血清中IBD抗体

2．5 试验数据分析

3 结果

3．1 免疫鸡感染基因Ⅶd型NDV对IBD疫苗免疫效果的影响

3．2 免疫鸡感染基因Ⅶd型NDV对AI疫苗免疫效果的影响

4 讨论

参考文献

全文小结

致谢

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