不典型结核病与结节病病理组织学鉴别方法的研究

摘要

目的:比较不同的PCR方法检测石蜡包埋病理组织中结核菌DNA的敏感性和特异性，选择最佳方法用于病理表现不典型之结核病与结节病的鉴别诊断，并评价其临床应用价值。 方法:一、不同方法的比较及最优PCR路线的确立：1、标本选择：取已确诊并经治疗已痊愈的典型结核病和结节病患者的石蜡包埋病理组织共68例，其中伴有干酪样坏死性肉芽肿的结核病组织37例；结节病组织3l例。2、用三种不同的PCR扩增方法分别进行结核菌DNA的扩增：(1)间接原位巢式PCR法：取确诊结核病和结节病的病理组织切片，以结核分支杆菌插入序列IS6110为靶序列设计两对引物(分别为内引物和外引物)，以外引物进行第一轮原位核酸扩增后，再以内引物进行第二轮扩增，用地高辛标记DNA探针行原位杂交，辣根过氧化物酶检测系统检测结果，同时设立阳性和阴性对照。(2)液相巢式PCR法：用酚．氯仿方法提取上述标本中DNA,并以此为模板，用上述两对引物，于Eppendorf管中进行两轮核酸扩增如上，凝胶电泳检测扩增结果，同时设立阳性和阴性对照。(3)液相普通PCR法：用上述所提DNA作模板，以上述两对引物中的内引物作为引物，进行一轮核酸扩增，并用凝胶电泳检测扩增结果，设立阳性和阴性对照。3、比较不同PCR方法的灵敏度和特异度，结合临床实际考虑，确立最优化PCR技术路线。二、将已经建立的、较其他方法更具优势的间接原位巢式PCR方法用于病理表现不典型之结核病与结节病组织标本的检测：1．标本选择：取经治疗后确珍，但病理表现不典型的结核病和结节病患者石蜡包埋病理组织各30例，并设立阳性和阴性对照。2、用间接原位巢式PCR方法进行结核菌DNA的扩增，检测扩增结果。3．用SPSS软件，行x2检验对实验结果进行统计学处理和分析。 结果:1、各种方法的优劣比较：(1)用三种方法检测两组标本，均可观察到两组阳性率之间有显著差异。(2)间接原位巢式PCR法与液相巢式PCR法的灵敏度与特异度相仿，但间接原位巢式PCR法具有直观性、细胞定位等功能。(3)液相普通PCR方法虽有较高特异性，但灵敏度较低，在临床上发生结核病漏检可能性较大。综合考虑各种方法的敏感性、特异性、直观性等诸多方面，最终选取间接原位巢式PCR法用于鉴别检测病理表现不典型的结核病和结节病。2、间接原位巢式PCR法检测结果显示，结核病组的阳性检出率为93．3％，结节病组的阳性检出率为23．3％，其差异有显著统计学意义(p<0．01)。两组阳性标本中，结核菌DNA分布有所不同，如结核病标本中，结核菌DNA主要分布于郎罕巨细胞周围；而在结节病标本中，结核菌DNA则主要散在分布于淋巴细胞或间质中。 结论:1、巢式PCR敏感度较普通PCR明显增高。2、间接原位巢式PCR法灵敏度、特异度与液相巢式PCR相仿，但间接原位巢式PCR所需材料更少，结果更直观，并且具有细胞内定位功能，为不典型之结核病和结节病病理标本鉴别诊断的最佳选择。3、间接原位巢式PCR方法为病理表现不典型的结核病和结节病的鉴别诊断，提供了一种既灵敏、可靠，又直观、实用的手段。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一部分：建立并筛选检测病理标本中结核菌DNA的方法

第二部分:间接原位巢式PCR法从病理角度鉴别不典型结核病和结节病

讨论

总结

参考文献

结节病病因及发病机制研究现状

巢式PCR法在结核病与结节病鉴别中的应用

中英文缩写词汇表

致谢