吴茱萸碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡影响的研究

摘要

胶质瘤是中枢神经系统中最常见的颅内肿瘤,并且有着很高的致死率。与此同时,它有较高的侵袭性且不易于治疗。对胶质瘤的各种临床治疗仅仅只能延长患者几个月的生存期,预后极其不佳。因此,发掘一个新的抗癌药物对于胶质瘤的治疗至关重要。传统中药用于治疗肿瘤已有很长一段时间,大量研究表明许多中药的提取物或者他们的混合物在体内外都有抗癌作用。吴茱萸碱是从吴茱萸的中提取的主要生物碱,它具有抑制肿瘤生长和转移等多种生物学特性。然而吴茱萸碱对胶质瘤的作用及其作用机制均不明确。
　　目的：研究吴茱萸碱(Evodiamine)对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。
　　方法：体外培养人胶质瘤U251细胞,并将其分为空白对照组及25、50、100μg.mL-1吴茱萸碱4组。应用MTT法检测吴茱萸碱在24、48和72h对U251细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色法检测吴茱萸碱诱导胶质瘤U251细胞凋亡;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组24h细胞早期凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白的变化。
　　结果:与空白对照组同期比较,25、50、100μg.mL-1吴茱萸碱组生长抑制率在24、48、72h均增加,随着吴茱萸碱浓度增加和作用时间延长,细胞增殖抑制越明显,其抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst33258荧光染色显示吴茱萸碱作用24 h后U251细胞出现典型的细胞凋亡特征,各处理组均可见凋亡小体。U251细胞凋亡小体数量随着吴茱萸碱浓度的增加而逐渐增多,且碎裂的颗粒逐渐变小。随着吴茱萸碱浓度增加和作用时间延长,细胞的凋亡率逐渐升高。与空白对照组自发早期凋亡率3.12％比较,25、50、100μg.mL-1吴茱萸碱组早期凋亡率分别为8.65％、19.47％及28.97％,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot实验显示,与空白对照组同期比较,25、50、100μg.mL-1吴茱萸碱上调了Fas、FADD、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达,Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达明显上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。上述指标均呈时间和剂量依赖性。
　　结论:吴茱萸碱对U251细胞具有明显的抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Fas途径和下调Bcl-2/Bax有关。

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前言

1、阻滞细胞周期

2、诱导细胞凋亡

3、抑制肿瘤血管生成

4、逆转肿瘤细胞多重耐药性

5、调节机体免疫力

材料与方法

1.实验材料

2.试验方法

3.统计学分析

结果

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献

缩略词表

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