积雪草酸影响HaCaT细胞增殖和对咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的作用研究

摘要

背景：积雪草酸是一种主要存在于伞形科植物积雪草中的乌苏烷型五环三萜酸，其资源丰富，目前主要分布于我国长江流域以南地区。现有研究表明，积雪草酸具有抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、抗抑郁等多种药理活性。银屑病是一种病理表现为角质形成细胞（keratinocyte, KC）的过度增殖和炎症细胞浸润的慢性皮肤病。HaCaT细胞是自发永生化的人角化细胞系，已广泛用于许多皮肤疾病的研究。本实验拟探讨积雪草酸对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型及其对角质形成细胞的作用和机制。
　　方法：建立咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型，考察积雪草酸对小鼠皮损组织的影响；测定血清中IL-17、IL-23、TNF-α的含量来检测炎症因子的释放；检测小鼠皮损组织中PCNA、Bax、Bcl-2蛋白的表达。建立TNF-α诱导HaCaT细胞增殖的细胞模型，考察积雪草酸抑制TNF-α诱导HaCaT细胞增殖的分子机制。以不同浓度积雪草酸作用于TNF-α诱导HaCaT细胞24 h，MTT法检测细胞活性；流式细胞术检测细胞周期；免疫荧光染色法检测NF-κB的核转位；Western blot法检测细胞蛋白NF-κB、p-NF-κB的表达。研究积雪草酸对HaCaT细胞凋亡的影响：MTT法检测细胞活性；DCFH-DA染色检测细胞内及线粒体ROS生成；JC-1染色检测线粒体膜电位，荧光素酶法检测ATP含量，分析线粒体功能。
　　结果：通过对皮肤的外观观察以及组织H&E染色发现，积雪草酸对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型皮肤的银屑样症状具有较好的改善效果。检测小鼠血清中IL-17、IL-23、TNF-α的含量发现，咪喹莫特造成小鼠银屑病模型时，IL-17、IL-23、TNF-α含量显著升高（P＜0.01），积雪草酸给药处理后能够明显降低TNF-α的升高，但是对IL-17、IL-23无明显影响。检测小鼠皮损组织蛋白的表达水平发现，积雪草酸处理后，细胞核抗原PCNA表达水平降低、细胞凋亡蛋白Bax表达水平升高、Bcl-2表达水平降低。
　　细胞水平研究结果显示，积雪草酸能够显著抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖，阻滞细胞周期于 G2期。同时我们发现积雪草酸能够抑制 TNF-α诱导的NF-κB磷酸化，并阻止其转位入核。此外，积雪草酸处理能够诱导HaCaT细胞内ROS生成增多，促使线粒体膜电位倒塌，抑制细胞内ATP的生成，最终诱导角质形成细胞凋亡。
　　结论：积雪草酸具有良好改善小鼠银屑病的作用，表现为抑制角质形成细胞的增殖。在细胞水平，积雪草酸能够抑制TNF-α诱导HaCaT细胞增殖并显著能够损伤 HaCaT细胞的线粒体，诱导细胞发生凋亡。其机制的可能与积雪草酸能够抑制TNF-α诱导的NF-κB通路活化相关。

目录

声明

缩略词表

第一章 引 言

1.1治疗银屑病药物的研究进展

1.2积雪草酸的药理研究进展

1.3本课题研究思路

第二章 积雪草酸对咪喹莫特诱导的BABL/C小鼠银屑病模型的治疗作用

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4本章小结

第三章 积雪草酸对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖的影响

3.1实验材料

3.2 实验方法

3.3结果

3.4 本章小结

第四章 积雪草酸抑制HaCaT细胞增殖机制研究

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3实验结果

4.4 本章小结

第五章 讨 论

结论与展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章