植物乳杆菌乳酸脱氢酶发酵与提取方法研究

摘要

乳酸脱氢酶(LDH)广泛存在于动物组织、细菌和植物中，是生物体内糖酵解过程中重要的氧化还原酶，催化丙酮酸向乳酸的转化，是重要的诊断试剂用酶。本文以乳酸脱氢酶的开发和应用为目的，对自筛菌株植物乳杆菌RS2-2进行紫外诱变选育高产菌株，重新优化产酶条件，提高LDH发酵单位，进行了植物乳杆菌发酵生产LDH1.5m3发酵罐的中试研究，并对连续发酵产酶条件进行了初步研究。经过紫外诱变和发酵条件优化，菌体酶活比出发菌株提高了69.3％。在25L罐发酵成功的基础上进行了1.5m3发酵罐的中试实验并取得了成功，酶活达到了1300U/g。 对适合工业化生产的菌体破碎条件进行了研究。根据菌体特点重点考察了高压均质破碎法和溶菌酶破碎法的酶活释放情况，确定高压均质破碎和溶菌酶破碎的最佳工艺条件。实验发现单独的高压均质处理和溶菌酶处理都不能够满足菌体破碎要求。采用溶菌酶复合高压均质处理的方法能够使菌体破碎效果更佳，破碎菌体酶活释放量达到1400U/g。 考察了LDH酶液和冻干粉的储存稳定性，以及加入不同稳定助剂后酶活力的变化，发现半胱氨酸可提高LDH酶液的储存稳定性，储存120天后酶活力比对照提高了69％。海藻糖可提高LDH在冷冻干燥过程中的稳定性，冷冻干燥前后可以使酶活力比对照提高34％。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章绪论

第二章LDH高产菌株的诱变选育及培养条件优化

第三章LDH批次发酵及连续发酵研究

第四章细菌乳酸脱氢酶提取研究

第五章LDH稳定性研究

结论及展望

参考文献

硕士研究生期间在科学技术期刊上发表的论文

致谢