银杏叶提取物对诱导型一氧化氮合酶在内皮细胞表达的抑制作用

摘要

目的：探讨银杏叶提取物对诱导型一氧化氮合酶的抑制作用及对血管内皮细胞保护作用的机制。
　　材料与方法：体外培养人内皮细胞 ECV304细胞，应用RPMI-1640培养液，分别培养加入不同浓度的银杏叶提取物的细胞和空白组细胞。在培养细胞2小时和4小时后，分别测定一氧化氮代谢产物的量；通过免疫印迹分析NOS蛋白的表达；运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析mRNA水平。
　　结果：(1)银杏叶提取物对内皮细胞的作用不依赖于细胞内钙离子浓度的变化。经过银杏叶提取物预处理的细胞，培养2小时后，对人内皮细胞释放 NO代谢物的量无明显影响。经过银杏叶提取物处理的细胞孵育后4小时，NO代谢产物释放到培养基中的数量显著减少。通过各种浓度的银杏叶提取物孵育的细胞4小时，并测定NO释放到培养基的量。银杏叶提取物抑制内皮细胞NO代谢产物的释放呈浓度依赖性的关系。在培养基中加入的钙离子载体没有改变银杏叶提取物对血管内皮细胞释放一氧化氮的抑制作用。(2)在银杏叶提取物处理的细胞中NOS活性降低可能由于酶蛋白的降低。在Western blotting结果显示，经过50μg/ml和100μg/ml银杏叶提取物处理的细胞中的iNOS蛋白水平分别降低27％和43%。(3)经银杏叶提取物处理过的细胞iNOS蛋白水平降低可能是由于mRNA表达受到影响。经过银杏叶提取物处理过的细胞，与对照比相比，iNOS与β-actin比值从0.22分别降低到0.16和0.14.具有统计学意义.
　　结论：
　　1.银杏叶提取物对内皮细胞释放NO的抑制作用不依赖于细胞内钙离子浓度的变化。
　　2.在银杏叶提取物处理的细胞中NOS活性降低可能由于酶蛋白iNOS表达的降低。
　　3.经银杏叶提取物处理过的细胞 iNOS蛋白水平降低可能是由于抑制mRNA表达。

目录

声明

1. Introduction

2 Materials and Methods

2.1 Materials

2.2 Methods

3. Results

3.1 Effect of EGb on NO Release by Endothelial Cells

3.2 Effect of EGb on the Expression of NOS Proteins in Endothelial Cells

3.3 Effect of EGb on the Expression of NOS mRNA in Endothelial Cell

4. Discussion

5. Conclusions

参考文献

Review: The research progress of Ginkgo biloba

致谢