羟基红花黄色素A对脂多糖作用后血管内皮细胞诱导型一氧化氮合酶等炎性介质表达的影响

摘要

本课题旨在探讨HSYA对LPS处理后HUVECs细胞株TNFα、IL-6、IL-8、iNOS等相关炎症因子表达的影响。本实验可分成两个部分：
　　 第一部分不同浓度LPS及1 mg/L LPS+1 mM/L HSYA处理HUVECs细胞株后相关炎症介质转录水平表达的变化。
　　 方法：采用不同浓度的LPS（0.01 mg/L、0.1 mg/L和1 mg/L）处理HUVECs24 h后，用RT-PCR方法检测TNFα、IL-6、IL-8、iNOS的mRNA表达变化；然后用1 mg/L LPS+1 mM/L HSYA处理HUVECs细胞株，HUVECs细胞加入1 mM/L的HSYA处理2 h后，再加入1 mg/L LPS浓度处理24 h，用RT-PCR检测TNFα、IL-6、iNOS mRNA表达变化。
　　 结果：随着LPS浓度增高，IL-8表达量无明显变化，而TNFα、IL-6及iNOS表达量增高；当LPS浓度为1 mg/L时，TNFα、IL-6及iNOS mRNA的表达具有明显差异。1 mg/L LPS+1 mM/L HSYA细胞组TNFα、IL-6 mRNA表达量与1 mg/L LPS细胞组无明显变化，而iNOS mRNA表达量降低。
　　 结论：成功培养HUVECs细胞株，生长良好；用1mg/L LPS成功建立血管内皮细胞损伤模型；并成功筛选出iNOS因子深入研究HSYA对其表达的影响。
　　 第二部分主要深入探讨HSYA对LPS作用后HUVECs诱导型一氧化氮合酶表达的影响。
　　 方法：分别用0.01 mM/L、0.1 mM/L、和1 mM/L的HSYA孵育HUVECs2h后再加入1 mg/L的LPS处理24h，用MTT法检测细胞增殖情况，硝基还原酶法检测培养液中一氧化氮（NO）含量，RT-PCR及Western blotting检测iNOS mRNA及蛋白水平的表达。
　　 结果：与空白对照组相比，0.01 mM/L、0.1 mM/L HSYA对LPS引起的iNOS升高无明显作用，但1 mM/L HSYA能明显抑制LPS作用后高浓度表达的iNOS量。
　　 结论：HSYA能下调LPS所致iNOS的异常表达，这可能有助于血管炎症疾病及血管内皮损伤相关疾病的预防和治疗。