小分子化合物和hiPS培养液对猪体细胞核移植胚胎的研究

摘要

目前体细胞核移植技术生产克隆猪在农业和医学等领域都有着广泛的应用前景。但由于体细胞核移植效率一直很低，限制了克隆猪的应用。影响克隆效率的原因有很多，例如表观遗传程序的不完全表达、不适的培养环境及染色体的异常化等。本文首次研究了罗米鲁曲对猪体细胞核移植胚胎后期发育能力的影响，并首次将猪体细胞核移植早期囊胚在人诱导多功能干细胞培养液中培养，并分析其结果。
　　本研究主要内容包括：⑴利用不同浓度的罗米鲁曲处理猪体细胞克隆胚胎24小时，寻找最适合浓度，随后用最适浓度处理不同时间，确定最佳时间和最佳浓度。实验结果发现在不同的处理浓度下（0 nM，50 nM，100 nM，200 nM），其中100 nM的囊胚率显著优于对照组和其他处理组(9.8％，12.3%，18.3%，5.2%，P<0.05)。用最优浓度100nM的罗米鲁曲进行不同时间的处理时（0h，12h，24h，48h），结果显示，24小时的囊胚率优于对照组及其他处理组(8.0%，4.7%，13.7%，11.1%)。最后将100nM罗米鲁曲处理24小时的猪体细胞核移植胚胎移植到两头代孕母猪体内，其中一头怀孕。以上结果表明，罗米鲁曲对猪体细胞核移植胚胎体外发育起到促进作用。⑵研究两种不同体外培养系统培养的囊胚的质量，分别命名为one-step和two-step培养系统。在one-step培养系统中，猪核移植囊胚在NCSU-37培养液中培养7天，在第5天更换1次培养液。在two-step培养系统中，猪核移植胚胎在NCSU-37培养液培养5天，之后更换到人诱导多功能干细胞培养液中培养2天（共7天）。随后，检测两种体外培养系统中培养的猪囊胚的形态和质量。囊胚在one-step和two-step培养体系中，孵化的直径、周长及面积的比率存在显著性差异(3.01±0.20 versus1.59±0.19，P<0.01;3.30±0.06 versus1.38±0.18，P<0.01;10.23±0.33 versus1.12±0.37，P<0.01)。two-step培养系统中的囊胚形态上显著优于one-step培养系统，而且two-step系统中囊胚细胞数是one-step系统中囊胚细胞数的3倍以上。这些结果表明人诱导多功能干细胞培养液可以显著提高猪体细胞核移植囊胚的形态和质量。

目录

声明

Research background

1.1Information of nuclear transfer

1.2 The research of applications of cloned pigs

1.3The story about epigenetic modifications in nuclear transfer

1.4The history of MGMT and MGMT inhibitors

1.5The purpose of this study

Experiment 1Effects of Lomeguatrib treatment after somatic cell nuclear transfer on developmental competence of porcine embryos

1 Introduction

2Materials and Methods

3Results

4Discussion

Experiment 2Human-induced pluripotent stem cell medium significantly improves the morphology and quality of pig blastocysts using somatic cell nuclear transfer

1 Introduction

2 Materials and Methods

3 Results

4 Discussion

Conclusion

参考文献

致谢

Publication