杉木转基因受体系统的建立及遗传转化研究

摘要

杉木是中国特有的常绿针叶树种之一.因其生长快,木材质量高,成林又迅速,而成为重要的商品用材和造林树种.该文以杉木幼胚、成熟合子胚、实生苗的子叶和下胚轴、试管苗茎段等不同外植体进行器官发生和体细胞胚胎发生研究,探讨了不同因素对器官发生或体胚发生的影响.在国内外首次诱导出了杉木体细胞胚并再生出植株,填补了国内外该领域的研究空白;建立了适于杉木遗传转化的稳定高效的组培受体系统;用石蜡切片方法,观察了不定芽和体胚的发生和发育过程;通过研究7个影响杉木转化效果的因素,初步确定了杉木茎段较为合适的转化体系,为杉木基因工程育种提供了关键的技术平台.通过研究7个影响杉木转化效果的因素,初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为:预培养1-3d,OD<,600>=0.1-0.4菌液浸染10-15min,共培养3-5d,共培养基pH值5.4附加AS80 u mol/L,共培养后延迟 3d筛选.该研究在初次筛选培养基上共得到186个Km抗性芽,在二次筛选培养基获得39个Km抗性芽.PCR检测有2个Km抗性芽呈稳定阳性,初步证明外源GAFP基因已整合到这两个Km抗性芽的基因组DNA中.

目录

文摘

英文文摘

致谢

上篇文献综述

第一章针叶树组织培养研究进展

1针叶树的器官发生与快速繁殖

2针叶树体细胞胚胎发生与植株再生

第二章针叶树种遗传转化研究进展

1农杆菌介导的针叶树遗传转化

2基因枪法

3电击法

4 PEG法

5针叶树种遗传转化存在的主要问题及解决办法

6本研究的目的及意义

下篇研究报告

第三章杉木愈伤组织的诱导及植株再生

1前言

2材料和方法

3实验结果与分析

4讨论

第四章杉木直接器官发生和体胚发生研究

1前言

2材料和方法

3实验结果与分析

4讨论

图版

第五章杉木遗传转化受体系统的建立

1前言

2材料和方法

3实验结果与分析

4讨论

图版

第六章杉木转天麻抗真菌蛋白基因研究

1前言

2材料和方法

3实验结果与分析

4讨论

图版

第七章主要结论和进一步研究的展望

1主要结论

2存在问题及进一步研究的展望

参考文献