‘红叶’杜仲不同外植体愈伤组织和丛生芽的诱导及增殖研究

摘要

‘红叶’杜仲（Eucommia ulmoides‘Hongye’）是杜仲科(Eucommiaceae)杜仲属(Eucommia Oliver)植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)的观赏品种，拥有重要的观赏价值和经济价值，应用前景非常广阔。目前‘红叶’杜仲的主要繁殖方式以嫁接繁殖为主，由于嫁接所需材料多，繁殖周期长，制约了‘红叶’杜仲工厂化生产和推广应用。因此，本文探讨用组织培养方法来繁殖‘红叶’杜仲。
　　本实验以二年生‘红叶’杜仲为材料，研究了消毒剂种类和消毒时间对外植体诱导的影响;外植体种类和采样时间、基本培养基、外源添加物、激素种类和浓度等对丛生芽和愈伤组织诱导率的影响;并对诱导出的丛生芽进行丛生芽增殖试验，对诱导出的愈伤组织进行增殖和丛生芽的诱导试验。取得了以下主要结果:
　　1.消毒剂种类和消毒时间对外植体的存活率有显著影响。适合‘红叶’杜仲的消毒剂为75％酒精和0.1％升汞交替使用;消毒时间因外植体种类而异;不同外植体的存活率存在差异。适合叶片和顶芽的消毒条件是:75％酒精45 s和0.1％升汞消毒3 min;口叶片的存活率88.89％，顶芽的存活率为22.23％。适合带芽茎段和茎段的消毒条件是:75％酒精45 s和0.1％升汞消毒5 min;带芽茎段和茎段的存活率均为66.67％。
　　2.外植体的种类对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织的诱导率有显著影响。外植体的采样部位对丛生芽和愈伤组织的诱导率没有显著差异。适合丛生芽诱导的外植体是带芽茎段，项芽诱导的丛生芽易褐化落叶，茎段和叶片不能诱导产生丛生芽;适合愈伤组织诱导的外植体是叶片;主枝和侧枝上采集的外植体诱导率没有显著差异。
　　3.基本培养基的种类对丛生芽和愈伤组织的诱导有显著影响。适合‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的基本培养基均为MS培养基。带芽茎段在MS培养基上丛生芽诱导率56.67％;叶片愈伤组织诱导率达90.0％。
　　4.蔗糖浓度为30g/L时，丛生芽诱导率达到最高为56.67％，愈伤组织诱导率达到最高为90％。活性炭能显著降低带芽茎段的褐化率，当活性炭浓度为1.0 g/L时，丛生芽褐化率最低为10.0％，丛生芽诱导率最高为63.33％。
　　5.激素种类和浓度对丛生芽和愈伤组织的诱导表现为:6-BA对带芽茎段丛生芽诱导有显著的促进作用，NAA和GA3对带芽茎段的丛生芽诱导有显著的抑制作用，当6-BA浓度为1.0 mg/L，丛生芽诱导率最高为86.67％。愈伤组织的诱导需要NAA，当NAA与6-BA比值为2时，带芽茎段和叶片愈伤组织诱导率为100％。
　　6.外植体采样时间对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织的诱导率有显著影响。‘红叶’杜仲外植体采样最佳时间为3月，这个时间的丛生芽和愈伤组织的诱导率最高。丛生芽诱导率由高到低依次为:3月＞4月＞5月＞9月＞7月=11月;愈伤组织诱导率由高到低依次为:3月＞4月＞5月＞9月＞7月＞11月。
　　7.适合丛生芽的增殖培养基为:MS+6-BA1.0 mg/L，丛生芽增殖系数最大，为189％。适合愈伤组织的继代培养基为:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA2.0 mg/L，愈伤组织增殖系数最大为243％。适合愈伤组织诱导丛生芽的培养基为:MS+6-BA1.0mg/L，诱导率为33.33％。

目录

声明

摘要

1 ‘红叶’杜仲研究进展

1．1 ‘红叶’杜仲的生物学特性及研究进展

1．1．1 生物学特性

1．1．2 价值及应用

1．1．3 繁殖方法与栽培技术

1．1．4 其他研究

1．2 组织培养技术研究进展

1．2．1 木本植物组织培养技术研究进展

1．2．2 离体器官发生方式

1．2．3 影响木本植物组织培养的主要因素

1．3 杜仲组织培养的研究进展

1．3．1 外植体的选择

1．3．2 分化途径

1．3．3 基本培养基

1．3．4 激素种类及配比

1．3．5 外源添加物的影响

1．3．6 培养条件

1．3．7 杜仲组织培养中存在的问题

1．4 研究意义、内容和技术路线

1．4．1 项目依托和研究意义

1．4．3 技术路线

1．4．2 主要研究内容

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 实验方法

3 结果与分析

3．1 消毒剂种类和消毒时间对‘红叶’杜仲外植体存活率的影响

3．1．1 消毒剂种类和消毒时间对‘红叶’杜仲带芽茎段存活率的影响

3．1．2 消毒剂种类和消毒时间对‘红叶’杜仲顶芽存活率的影响

3．1．3 消毒剂种类和消毒时间对‘红叶’杜仲茎段存活率的影响

3．1．4 消毒剂种类和消毒时间对‘红叶’杜仲叶片存活率的影响

3．2 ‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的外植体的筛选

3．2．1 带芽茎段

3．2．2 顶芽

3．2．3 茎段

3．2．4 叶片

3．3 基本培养基对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．3．1 基本培养基对带芽茎段丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．3．2 基本培养基对叶片丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．4 蔗糖和活性炭对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．4．1 蔗糖对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．4．2 活性炭对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．5 激素种类和浓度对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．5．1 6-BA对丛生芽诱导的影响

3．5．2 NAA对丛生芽诱导的影响

3．5．3 6-BA和NAA对丛生芽诱导的影响

3．5．4 GA3对丛生芽诱导的影晌

3．5．5 6-BA对愈伤组织诱导的影响

3．5．6 NAA对愈伤组织诱导的影响

3．5．7 6-BA和NAA对愈伤组织诱导的影响

3．6 外植体采样时间对‘红叶’杜仲丛生芽和愈伤组织诱导的影响

3．6．1 不同采样时间对‘红叶’杜仲带芽茎段丛生芽诱导的影响

3．6．2 不同采样时间对‘红叶’杜仲叶片愈伤组织诱导的影响

3．7 丛生芽的增殖

3．8 愈伤组织的增殖

3．9 愈伤组织诱导丛生芽

4 结论与讨论

4．1 结论

4．2 讨论

参考文献

附录

攻读学位期间主要学术成果

攻读学位期间参与学术研究项目

致谢