在自然临产和药物临产中与NF-kB相互作用的蛋白质的研究

摘要

目的:筛选足月自然临产和药物临产中人类子宫下段平滑肌组织内与核因子kappaB(NuclearfactorkappaB，NF-κB)相互作用的蛋白质，进一步阐明分娩发动的机制。
　　 方法:收集自然临产及药物临产(前列腺素E2栓诱导临产，简称药物临产)两种不同状态临产后子宫下段平滑肌标本，首先通过Westernblotting验证目的蛋白NF-κBp65的表达，然后采用免疫共沉淀方法，从临产后子宫下段平滑肌组织中筛选出与NF-κBp65结合的蛋白质复合物，经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术对含NF-κBp65结合蛋白的复合物进行分离，进而采用液相色谱一电喷雾串联质谱(liquidchromatography-tandemelectrospraymassspectrmetry，LC-ESI-MS/MS)结合数据库查询鉴定不同诱因的临产后子宫下段平滑肌组织中与NF-κB相互作用蛋白质。
　　 结果:1.经Westernblotting验证，自然临产组和药物临产组在分子量65KDa处均有明显的条带显示，提示两组子宫下段平滑肌组织中均有NF-κBp65的表达。
　　 2.收集自然临产组和药物临产组的免疫共沉淀复合物进行SDS-PAGE分离，两组均在分子量72KDa处观察到1条与阴性对照组(IgG抗体组)有差异的蛋白条带。
　　 3.经质谱分析及数据库查询，在人类自然临产和药物临产子宫下段平滑肌组织中鉴定了7个NF-κBp65结合蛋白，根据其功能注释，可将以上鉴定出蛋白质初步分为以下3类:①细胞结构相关蛋白质;②分子伴侣;③信号传导相关蛋白质。
　　 结论:采用免疫共沉淀方法结合肽质量指纹质谱技术，在自然临产组的子宫下段平滑肌组织内筛选了7个与NF-κBp65结合的蛋白质，包括:结蛋白、细丝蛋白-A、辅肌动蛋白、锌指蛋白、热休克蛋白70、膜联蛋白A6、EH-结构域蛋白2;在药物临产组的子宫下段平滑肌组织内筛选了5个与NF-κBp65结合的蛋白质，包括:结蛋白、细丝蛋白-A、辅肌动蛋白、热休克蛋白70、膜联蛋白A6。其中两组共有的有5个蛋白质，不同的有2个蛋白质。提示这些蛋白质可能在NF-κB参与的分娩发动中有作用。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 标本来源与分组

2．2 主要试剂及仪器

2．3 实验方法及步骤

第三章 结果

3．1 Western Blotting验证NF-кB p65蛋白的存在

3．2 免疫共沉淀和SDS-PAGE分析

3．3 质谱分析及数据库查询

3．4 所鉴定的蛋白质的分类

第四章 讨论

(1)热休克蛋白70

(2)膜联蛋白A6

展望

第五章 结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间主要的研究成果