既往季节性流感病毒感染对流感疫苗接种效果影响的研究

摘要

流感仍然是威胁人类健康的一类重要的呼吸道传染性疾病，流感病毒的变异导致人们经常遭受流感病毒的侵袭，流感病毒的感染诱导机体产生针对其的免疫反应，但这种免疫不能完全抵抗新型流感病毒的感染，本论文就基于这种感染产生的免疫反应，对接种流感病毒疫苗产生的影响效果进行研究，以期为预防流感提供一些有价值的参考。 本论文由五部分组成: （一）流感病毒、流感病毒疫苗、流感病毒感染等简介。以综述的形式描述了A型流感病毒的基本特征、流感疫苗的分类、流感病毒感染导致的非特异性免疫应答和特异性免疫应答等知识。 （二）季节性流感病毒感染后用H5N1NP M1DNA疫苗免疫对同型流感病毒攻击的保护效果研究。既往季节性流感病毒的感染导致感染者体内具有对流感病毒的免疫记忆，能削弱变异的流感病毒在体内的复制能力，对变异的流感病毒的感染提供部分的保护作用，但不能完全抵抗变异流感病毒的攻击。基于免疫记忆辅以流感病毒保守基因DNA疫苗免疫，增强机体抗流感病毒攻击的研究，对预防流感有一定的实际意义。本章利用A/PR8(H1N1)流感病毒感染BALB/c小鼠产生针对流感病毒的免疫记忆，用H5N1流感病毒内部保守基因NP、M1和NP+M1DNA疫苗免疫感染过的小鼠，和单独疫苗免疫组进行比较。用ELISA方法测定血清中特异性IgG抗体，利用ELISPOT检测脾脏细胞，用致死量H5N1流感病毒攻击小鼠后，取小鼠肺洗液测定小鼠肺部病毒滴度，并观察攻毒后小鼠的体重变化和存活率。结果表明，既往感染的基础上用NP+M1DNA疫苗免疫一次就能为小鼠提供很好的抗H5N1流感病毒攻击的保护作用。 （三）季节性流感病毒感染后用H5N1NP M1DNA疫苗免疫对流感病毒攻击的交叉保护效果研究。感染产生的免疫记忆，辅以H5N1流感病毒保守的NP、M1DNA疫苗免疫一次，就能抗同型的流感病毒的攻击，为了进一步研究抗异源的流感病毒攻击的效果，本章在第三章的基础上进行，实验利用A/PR8(H1N1)流感病毒感染小鼠，使小鼠体内产生针对流感病毒的免疫记忆，用H5N1流感病毒的保守基因NP+M1DNA疫苗免疫一次小鼠，四周后分别用致死性的野外分离的实验室小鼠适应株H9N2、H10N8流感病毒的攻击，取肺测小鼠肺部病毒滴度，观察病毒攻击后小鼠的体重丢失率和存活率。实验结果表明，H1N1流感病毒感染后产生的免疫记忆辅以H5N1NP+M1DNA疫苗免疫一次，能抗H9N2、H10N8流感病毒的攻击，表现出很好的抗异源病毒攻击的保护效果。 （四）季节性流感病毒感染产生的免疫原罪对接种流感病毒疫苗的影响。既往季节性流感病毒感染产生的免疫记忆，能在一定程度上产生免疫原罪，也称为初次抗原过失，即当新的亚型流感病毒感染时，体内产生的免疫反应会优先针对第一次或之前感染的流感病毒产生免疫反应，而针对现在感染的新亚型流感病毒产生的免疫反应就会削弱。免疫记忆的存在，不利于针对新的疫苗产生抗体，关于这个理论现在还存有争议，为了进一步论证这个问题，本章利用A/PR8流感病毒感染小鼠，四周后，分别免疫甲型H1N1流感病毒的灭活疫苗和HA DNA疫苗以及H5N1流感病毒的灭活疫苗，免疫三周后，取血测抗体，并用对应的同型病毒攻击。通过检测小鼠的抗体以及对病毒的抵抗作用，来衡量免疫效果。实验结果表明，预先感染流感病毒产生的免疫记忆对疫苗接种效果没有产生明显的干扰作用。 （五）壳聚糖增强流感病毒H5N1灭活疫苗效果研究。为解决当前全球面临的在流感流行和大流行期间流感疫苗短缺或抗原性差的问题，选取壳聚糖做流感疫苗佐剂，研究壳聚糖增强H5N1流感疫苗的佐剂效应。通过腹腔注射的方式将壳聚糖和不同剂量的H5N1流感病毒灭活疫苗共同免疫小鼠，检测小鼠初次免疫或加强免疫产生的抗体滴度、病毒攻击后小鼠肺部病毒含量、小鼠的体重变化以及小鼠的保护率，并与传统的临床上运用的铝佐剂的效果进行比较。研究结果表明，添加壳聚糖佐剂诱导产生了较高的抗体，增强小鼠抗病毒感染能力，减少小鼠肺部病毒量。结果显示，壳聚糖的佐剂效果与铝佐剂相当。

目录

摘要

第一章引言

1．流感病毒的基本特点

1．1流感病毒基因组结构及其编码的蛋白

2流感病毒的感染及流行

2．1流感病毒导致的临床症状

2．2流感病毒的流行和传播

3流感病毒疫苗研究进展

3．1传统的流感病毒疫苗

3．2新型的流感病毒疫苗

4抗流感病毒感染的免疫应答

4．1流感病毒感染的非特异性免疫应答

4．2流感病毒感染的特异性免疫应答

5．论文章节安排

第二章基于季节性流感病毒感染H5N1 NP M1 DNA疫苗对同型流感病毒的保护效果研究

1．前言

2．材料和方法

2．1流感病毒

2．2实验动物

2．3试剂和材料

2．4主要仪器

2．5 DNA疫苗制备

2．6实验方法

2．7统计分析

3．结果

3．1小鼠被动免疫抗流感病毒H1N1血清对流感病毒H5N1的保护效果

3．2感染H1N1，免疫H5N1 NP M1 DNA疫苗抗H5N1病毒的保护效果

3．3感染H1N1流感病毒，免疫H5N1 NP M1 DNA疫苗产生的IgG抗体

3．4感染H1N1，免疫H5N1 NP M1 DNA疫苗，H5N1病毒攻击后小鼠体重丢失和肺部病毒滴度结果

3．5感染H1N1，免疫H5N1 NP M1 DNA疫苗，细胞介导的免疫反应

4．讨论

第三章基于季节性流感病毒感染H5N1 NP M1 DNA疫苗的交叉保护效果研究

1．前言

2．材料和方法

2．1流感病毒

2．2实验动物

2．3试剂和材料

2．4实验方法

2．5统计分析

3．结果

3．1 H3N2流感病毒攻击后的保护效果

3．2甲型H1N1流感病毒攻击后的保护效果

3．3 H9N2流感病毒攻击后的保护效果

3．4 H10N8流感病毒攻击后的保护效果

4．讨论

第四章季节性流感病毒感染产生的免疫原罪对接种流感病毒疫苗的影响

1．前言

2．材料和方法

2．1实验动物

2．2疫苗

2．3免疫策略

2．4样本采集

2．5抗体检测

2．6肺部病毒滴度测定

2．7病毒攻击及小鼠流感症状及小鼠存活情况观察

2．8统计分析

3．结果

3．1甲型H1N1灭活疫苗诱导产生的IgG抗体

3．2甲型H1N1 HA DNA疫苗诱导产生IgG抗体

3．3 H5N1流感病毒灭活疫苗诱导产生IgG抗体

3．4甲型H1N1疫苗诱导产生的保护效果

3．5 H5N1疫苗诱导产生的保护效果

4．讨论

第五章壳聚糖增强流感病毒H5N1灭活疫苗效果研究

1．前言

2．材料与方法

2．1疫苗

2．2佐剂

2．3动物免疫

2．4病毒攻击

2．5提取样本

2．6抗体检测

2．7肺部病毒滴度检测

2．8统计分析

3．结果

3．2致死量病毒攻击后小鼠的肺部病毒滴度与存活率

3．3致死性同型病毒攻击后小鼠体重变化

4．讨论

结语

参考文献

附录：攻读博士学位期间已发表的学术论文

缩写表

致谢

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