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华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明
前言
1杆状病毒简介
1.1杆状病毒的分类和命名
1.2杆状病毒的结构
1.3杆状病毒的感染周期
1.4杆状病毒基因组特征
1.5杆状病毒的结构蛋白基因
1.6杆状病毒基因的时序性表达与相关基因
1.7杆状病毒DNA复制与相关基因
1.8杆状病毒与宿主相互作用的基因
1.9杆状病毒的应用
2本实验的研究背景及目的
2.1本实验的研究背景—杆状病毒与肌动蛋白的相互作用
2.2本试验的目的和意义
材料和方法
1材料
1.1大肠杆菌菌株
1.2昆虫细胞系
1.3病毒和Bacmid
1.4质粒
1.5引物
1.6培养基
1.7酶、化学试剂和试剂盒
1.8抗生素
2方法
2.1大肠杆菌中质粒DNA的提取方法
2.2大肠杆菌中Bacmid的提取法
2.3 DNA限制性酶切片段和PCR产物的回收
2.4 PCR(聚合酶链反应)
2.5电转化用感受态细胞的制备和电转化
2.6 SDS-PAGE
2.7杆状病毒对昆虫细胞的感染和扩增
2.8重组bacmid DNA转染Sf9细胞
2.9重组病毒的构建
2.10终点稀释法测定病毒滴度
2.11重组病毒生长特性比较
2.12重组病毒感染Sf9细胞的切片制备和电子显微镜观察
2.13转录分析(RT-PCR)
2.14 AcMNPV-GFP-actin(ph-)感染的Sf9细胞中肌动蛋白的亚细胞定位
2.15 Hoechst33258核染色以及激光共聚焦显微镜观察
2.16 CD处理
结果和讨论
1对重组病毒AcMNPV-GFP-actin(ph-)的分析
1.1AcMNPV-GFP-actin(ph-)感染Sf9细胞中肌动蛋白基因的转录分析
1.2 AcMNPV-GFP-actin(ph-)与AcMNPV生长特性的比较
1.3 AcMNPV-GFP-actin(ph-)感染的Sf9细胞中肌动蛋白的亚细胞定位
1.4 CD对AcMNPV-GFP-actin(ph-)感染的Sf9细胞中肌动蛋白亚细胞定位的影响
1.5 AcMNPV-GFP-actin(ph-)感染Sf9细胞的切片观察
2重组病毒的构建、鉴定和分析
2.1多角体基因的克隆和测序
2.2转移载体的构建
2.3重组Bacmid的构建
2.4重组病毒的获得和PCR鉴定
2.5感染实验
2.6重组病毒vAc-ph/70GA感染Sf9细胞的超微结构分析
2.7重组病毒vAc-ph和vAc-ph/70GA多角体基因表达的分析
2.8重组病毒vAc-ph/70GA的生长特性
3讨论
参考文献
已发表和撰写的文章
致谢
