日本乙型脑炎实验室诊断方法的研究和应用

摘要

日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)简称乙脑,是一种由乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的人畜共患的病毒性传染病.主要引起人的神经系统疾病以及猪的繁殖障碍,对养殖业和人类的健康有极大的威胁.猪是该病的扩散宿主,乙脑可以通过蚊虫传染到人类.因此乙脑的诊断和防治不但对于猪的规模化养殖有重要的意义,而且有重要的公共卫生学意义.该课题主要是乙脑实验室诊断方法的研究和初步应用.主要工作包括以下三个方面:1.乙脑全病毒酶联免疫吸附试验诊断(ELISA)方法的优化及试剂盒的研制与初步应用 结果表明ELISA试剂盒特异性强、敏感性高、重复性好.应用该试剂盒与血凝抑制试验(HI)对85份血清进行同步检测,两者符合率达86.2﹪.在此基础上,用ELISA试剂盒对127家猪场的1454份血清进行了检测,其中阳性882份,阳性率为60.7﹪,表明该试剂盒可以在临床上进行血清学的检测和流行病学的调查.2.乙脑病毒逆转录-聚合酶联反应诊断(RT-PCR)方法的建立和初步应用检测结果表明,该方法灵敏性高、特异性强.在此基础上对送检的38份病料进行了检测,其中检出阳性13份,阳性率为39.5﹪.试验结果表明,RT-PCR方法是临床检测乙脑病原的一种行之有效的方法,特别是对乙脑早期病例的检测.3.乙脑病毒E基因表达蛋白ELISA方法的建立和初步应用 用建立的该方法对送检的892份血清进行了检测,其中阳性血清422份,阳性率达47.3﹪.以上结果说明该方法可以替代全病毒ELISA方法用于流行病学调查和血清学诊断.

目录

摘要

Abstract

第一章文献综述

1.1乙脑发现历史、危害及流行特征

1.1.1乙脑历史

1.1.2乙脑危害

1.1.3乙脑流行特征

1.2乙脑的病原学特性

1.2.1分类及生物学特性

1.2.2血凝特性

1.2.3增殖特性

1.2.4发病机制

1.3乙脑病毒的分子生物学特性

1.3.1基因组结构

1.3.2结构蛋白

1.3.3非结构蛋白

1.4乙脑的诊断

1.4.1病原学诊断

1.4.2血清学诊断

1.5乙脑的防治

第二章研究目的和意义

第三章材料和方法

3.1材料

3.1.1毒株、血清与质粒

3.1.2实验所需试剂盒及工具酶

3.1.3 ELISA所用试剂

3.1.4血凝抑制试验所用试剂

3.1.5主要培养基

3.1.6琼脂糖凝胶电泳相关溶液

3.1.7 SDS-PAGE相关溶液

3.1.8包涵体提取相关溶液

3.1.9其它试剂

3.1.10 PCR引物

3.2方法

3.2.1全病毒ELISA方法的优化、试剂盒的研制与应用研究

3.2.2乙脑RT-PCR诊断方法的建立和应用

3.2.3乙脑E-ELISA方法的建立

第四章结果与分析

4.1全病毒ELISA方法的优化、试剂盒的研制与初步应用

4.1.1全病毒ELISA方法的优化

4.1.2 ELISA试剂盒的研制

4.1.3ELISA试剂盒的初步应用

4.2乙脑RT-PCR方法的建立与应用

4.2.1乙脑病毒PCR产物凝胶电泳结果

4.2.2特异性检测

4.2.3敏感性检测

4.2.4对可疑病例的检测

4.3乙脑E-ELISA方法的研究

4.3.1乙脑E蛋白的表达和包涵体的提取

4.3.2乙脑E-ELISA方法的建立

第五章讨论与结论

5.1讨论

5.1.1乙脑全病毒ELISA方法的优化、试剂盒的研制及初步应用

5.1.2乙脑病毒RT-PCR方法的建立和初步应用

5.1.3乙脑E蛋白ELISA方法的建立和初步应用

5.2结论

参考文献

缩略语表(Abbreviation)

致谢

附录