用益生菌制剂代替断奶仔猪日粮中抗生素的实验研究

摘要

本研究将分离鉴定的具有良好安全性能和体外益生特性的屎肠球菌HDRsEF1菌株和枯草芽胞杆菌HDRsBS1菌株进行复合，制成益生菌制剂，部分或全部替代猪教槽料和保育料中的抗生素，对断奶仔猪进行饲喂试验，研究该益生菌制剂部分或全部替代饲料中抗生素的可行性及其机制，以该制剂对断奶仔猪的生产性能、血液生化指标、血液抗体水平、吞噬细胞吞噬活性、胃肠道pH值、免疫器官指数、黏膜SIgA水平、肠道黏膜形态和肠道菌群的影响为评价指标，为该益生菌制剂作为抗生素替代品在断奶仔猪中应用奠定理论和实践依据。
　　本试验选取28日龄杜长大三元杂交断奶仔猪192头，分为3个组:抗生素对照组（基础日粮+20g/t硫酸粘杆菌素+50g/t吉它霉素，抗生素组）、抗生素部分替代组（基础日粮+20g/t硫酸粘杆菌素+100g/t枯草芽胞杆菌+300g/t屎肠球菌，部分替代组）、抗生素全部替代组（基础日粮+100g/t枯草芽胞杆菌+300g/t屎肠球菌，益生菌组），每组4个重复，试验期为35d。试验结果及结论如下:
　　益生菌组和部分替代组与抗生素组相比，在头均日增重、头均日耗料量和料肉比等经济性状指标上持平，差异均不显著(P＞0.05);腹泻率分别降低32.1％(P＜0.05)和36.6％(P＜0.05);各组均无仔猪死亡现象。结果表明，本研究所用益生菌制剂能达到与饲用抗生素同等水平的促生长效果，而且在降低仔猪腹泻率上明显优于饲用抗生素。
　　用直接ELISA方法检测肠道和气管黏膜SIgA水平，与抗生素组比较，益生菌组气管SIgA水平提高108.5％(P＜0.01);十二指肠SIgA水平提高51.5％(P＜0.05);空肠SIgA水平提高22.5％(P＞0.05)。与抗生素组相比，部分替代组和益生菌组血清中各类免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)含量均显著升高;特异性猪瘟(HC)抗体水平分别提高53.42％(P＜0.05)和32.73％(P＜0.05);口蹄疫(FMD)抗体水平分别提高22.23％(P＜0.05)和39.21％(P＜0.05)，部分替代组、益生菌组和抗生素组血清中HC和FMD抗体检测阳性率均为100％。结果表明，本研究所用益生菌制剂可明显增强断奶仔猪的免疫力、提高猪场常用疫苗的特异性抗体水平。
　　益生菌组和部分替代组与抗生素组相比，在血液生化指标上差异均不显著(P＞0.05)，在一定程度上优于抗生素对照组。结果表明，本研究所用益生菌制剂对猪肝脏和心脏功能没有不良影响。
　　屠宰后相关指标的检测仅针对抗生素组和益生菌组。与抗生素组相比，益生菌组吞噬细胞吞噬百分比提高17.08％(P＜0.05);胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠内容物pH值分别降低了3.64％(P＞0.05)、5.76％(P＞0.05)、3.49％(P＜0.05)、8.48％(P＜0.05)、8.25％(P＜0.05)、9.87％(P＜0.05)和5.50％(P＜0.05);脾脏指数和下颌淋巴结指数分别提高1.1％(P＞0.05)和14.9％(P＞0.05);十二指肠、空肠、回肠和结肠的绒毛长度分别增加14.71％(P＜0.05)，12.73％(P＜0.05)，15.87％(P＜0.05)，19.46％(P＜0.05)，绒毛长度/隐窝深度比值分别增加12.79％(P＜0.05)、16.03％(P＜0.05)、13.20％(P＜0.05)、16.83％(P＜0.05)。结果表明，本研究所用益生菌制剂在改善肠道酸环境、增强黏膜免疫和保护促进肠道功能方面均显著优于饲用抗生素。
　　肠道菌群PCR-DGGE图谱显示，试验前期即断奶前:各组粪便细菌谱带较少，且颜色较淡，组间细菌种类差异较小，相似性较高。试验后期即断奶35d，各组粪便细菌谱带较多，出现部分较深的条带，组间表现出一定的差异，部分替代组和益生菌组与抗生素组明显分为两大菌群，部分替代组和益生菌组之间存在许多相似条带，且与抗生素组有较明显的差异。结果显示，本研究所用益生菌制剂对断奶仔猪肠道微生物区系的发展和建立有明显影响。

目录

声明

摘要

缩略词

1 前言

1．1 益生菌概述

1．1．1 益生菌的概念

1．1．2 益生菌的筛选标准及菌种

1．1．3 微生态制剂的益生作用及机理

1．1．4 微生态制剂生产工艺

1．2 微生态制剂在国内外研究和生产概况

1．2．1 微生态制剂在国外研究和生产概况

1．2．2 微生态制剂在国内研究和生产概况

1．3 微生态制剂在国内外的应用概况

1．3．1 微生态制剂在猪生产中的应用

1．3．2 微生态制剂在禽生产中的应用

1．3．3 微生态制剂在反刍动物生产中的应用

1．3．4 微生态制剂在水产养殖中的应用

1．4 微生态制剂存在的问题、发展趋势和应用前景

1．4．1 微生态制剂存在的问题

1．4．2 微生态制剂的发展趋势

1．4．3 微生态制剂的应用前景

2 本研究的目的与意义

3 材料与方法

3．1 材料

3．1．1 益生菌制剂

3．1．2 试验基础日粮

3．1．3 试验动物

3．1．4 所用试剂及配制

3．1．5 主要仪器设备

3．2 方法

3．2．1 饲喂试验场所

3．2．2 试验设计

3．2．3 饲养管理

3．2．4 生产性能指标测定

3．2．5 血液生化指标测定

3．2．6 血液抗体指标测定

3．2．7 屠宰后相关指标测定

3．2．8 肠道菌群结构变化测定

3．2．9 数据分析

4 结果与分析

4．1 益生菌制剂对生产性能的影响

4．2 益生菌制剂对血液生化指标的影响

4．2．1 血清AST、ALT、ALP和LDH含量变化

4．2．2 血清TP、ALB和GLO含量变化

4．2．3 血清BUN和GLU含量变化

4．3 益生菌制剂对血液抗体指标的影响

4．3．1 血清IgA、IgG和IgM抗体水平变化

4．3．2 血清HC和FMD抗体水平变化

4．4 益生菌制剂对腹腔吞噬细胞吞噬活性的影响

4．5 益生菌制剂对胃肠道pH值的影响

4．6 益生菌制剂对黏膜SIgA水平的影响

4．7 益生菌制剂对免疫器官指数的影响

4．8 益生菌制剂对肠道黏膜形态结构的影响

4．9 益生菌制剂对肠道菌群结构的影响

4．9．1 试验前期粪便样品细菌16S rDNA V3区PCR结果

4．9．2 试验后期粪便样品细菌16S rDNA V3区PCR结果

4．9．3 试验各组粪便样品PCR-DGGE电泳图谱及多样性分析

4．9．4 试验各组粪便样品PCR-DGGE相似性分析

5 讨论

5．1 益生菌制剂对生产性能的影响

5．2 益生菌制剂对血液生化指标的影响

5．3 益生菌制剂对免疫指标的影响

5．4 益生菌制剂对胃肠道pH值的影响

5．5 益生菌制剂对肠黏膜形态结构的影响

5．6 益生菌制剂对肠道菌群结构的影响

5．7 试验分组的设计

6 结论

参考文献

附录

研究生期间发表的论文及专利

致谢