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人牙龈上皮细胞诱导分泌β-防御素的相关研究

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前言

实 验 材 料

一、主要实验试剂

二、主要实验设备

实 验 方 法

一、牙龈上皮细胞的培养

二、 牙龈上皮细胞的体外诱导

三、 细胞总RNA的提取及逆转录

四、 Real-time PCR 检测β-防御素的表达

五、 统计分析

实 验 结 果

一、 牙龈上皮细胞原代培养结果

二、MAPK抑制剂对牙龈上皮细胞在IL-1β诱导下分泌β-防御素的作用

三、MAPK抑制剂对牙龈上皮细胞在TNF-α诱导下分泌β-防御素的作用

四、NF-κB抑制剂对牙龈上皮细胞在IL-1β诱导下分泌β-防御素的作用

五、NF-κB抑制剂对牙龈上皮细胞在TNF-α诱导下分泌β-防御素的作用

讨论

一、 p38 MAPK和NF-κB信号通路在IL-1β和TNF-α诱导牙龈上皮细胞分泌HBD-2中发挥重要作用

二、 p38 MAPK和NF-κB信号通路在IL-1β和TNF-α诱导牙龈上皮细胞分泌HBD-1,3和HBD-2的作用中存在差异

参考文献

综述

参 考 文 献

附 录 一

附 录 二

致谢

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摘要

目的:研究牙龈上皮细胞在炎症因子IL-1β,TNF-α诱导下分泌β-防御素1,2,3的信号通路,为牙龈的抗感染研究提供进一步的理论基础。
  材料和方法:取协和医院口腔颌面外科因拔除第三磨牙或助萌需切除的健康牙龈,年龄不超过30岁,用酶消化法原代培养人牙龈上皮细胞,并用10μmol/LMAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂BAY11-7082孵育2h,而后用150ng/mlIL-1β或TNF-α诱导抑制剂孵育过的细胞,24h后提取细胞RNA,实时荧光定量PCR检测β-防御素1,2,3的基因表达水平。
  结果:在MAPK或NF-κB抑制剂存在的情况下,人牙龈上皮细胞经炎症因子IL-1β,TNF-α诱导后,HBD-1的表达量无明显变化;但HBD-2的表达量明显降低,MAPK抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-2的量分别下降81%和76%,NF-κB抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-2的量分别下降93%和95%;两种抑制剂对HBD-3的表达量表现出不同效应,MAPK抑制剂使牙龈上皮细胞在IL-1β和TNF-α诱导下分泌HBD-3的量分别下降65%和66%,而NF-κB抑制剂对HBD-3的表达量无明显影响。
  结论:人牙龈上皮细胞较稳定的分泌HBD-1,不受外界炎症因子及信号通路抑制剂的影响。MAPK和NF-κB信号通路在HBD-2的诱导分泌中起了非常重要的作用;本研究中MAPK信号通路与HBD-3的诱导表达密切相关。

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