氯维地平及其主要代谢物在Beagle犬体内药代动力学及大鼠组织分布研究

摘要

[目的]建立灵敏度高、方便快捷的LC-MS/MS方法分别测定Beagle犬血浆中和SD大鼠12个主要组织中氯维地平及其主要代谢物氯维地平酸（H152/81）的浓度，研究两化合物在Beagle犬体内的药代动力学过程以及其在SD大鼠体内的组织分布特征，比较丁酸氯维地平注射液国产受试制剂和原研参比制剂中氯维地平及H152/81的Tmax，Cmax，AUC等主要药代动力学参数及其在组织中的含量分布，评价受试制剂丁酸氯维地平注射液与原研产品质量的一致性。
　　[方法]（1）Beagle犬体内药代动力学研究：采用随机、二周期、双交叉的设计，将10只健康雄性Beagle犬分为2组，每只犬的给药方式和给药剂量为：丁酸氯维地平注射液受试制剂或参比制剂静脉恒速滴注，滴注速率17μg/kg/min，滴注时间40 min，于给药前和给药后2、5、10、20、30、40、42、45、50、60、70、80、90、120 min采集血样。采用LC-MS/MS法测定犬血浆中的药物浓度，使用DAS3.0软件计算药动学参数和进行生物等效性分析。（2）SD大鼠体内组织分布研究：将30只雄性SD大鼠随机分为2大组，每组又分为3小组，每只大鼠的给药剂量和给药方式为：丁酸氯维地平注射液受试制剂或参比制剂5 mg/kg尾静脉推注，分别于给药后10 min、30 min和1.5 h股动脉放血处死大鼠，解剖获得12个主要组织。采用LC-MS/MS法测定大鼠各个组织中的药物含量，应用SPSS17.0软件进行统计学分析。
　　[结果]（1）检测方法：建立了LC-MS/MS法分别测定犬血浆中和大鼠组织中氯维地平及其主要代谢物的浓度。血浆中氯维地平和氯维地平酸的定量下限分别为0.3ng/mL和10ng/mL，平均相对回收率分别在96.39~102.73％和93.58~102.73%之间；组织中氯维地平和氯维地平酸的定量下限分别为0.03ng和10ng，平均相对回收率在分别在97.10~97.91%和91.67~102.73%之间，日内、间精密度（RSD）均小于15%。（2）Beagle犬体内药代动力学研究：10只Beagle犬单剂量静脉恒速滴注丁酸氯维地平注射液后，通过测得的血药浓度数据计算药动学参数。以原研制剂作为参比，远大医药（中国）有限公司研制的丁酸氯维地平注射液有效成分氯维地平的相对生物利用度为97.1±18.9％（以AUC0-t计算）；主要代谢产物氯维地平酸的相对生物利用度为93.4±10.6％（以AUC0-t计算）。经方差分析、双单侧t检验、（1-2α）%置信期间法和Wilcoxon非参数检验证明，两制剂的Cmax，AUC0-t，AUC0-∞和Tmax均等效。（3） SD大鼠体内组织分布研究：30只SD大鼠尾静脉注射丁酸氯维地平注射液后，受试制剂和参比制剂中的氯维地平及其主要代谢产物在12个主要组织器官中各时间点（10min、30min和1.5h）的含量分布经统计学分析显示无显著性差异。
　　[结论]本试验分别建立了测定Beagle犬血浆中和大鼠组织中氯维地平及氯维地平酸浓度的LC-MS/MS法，所建立的检测方法灵敏度高、方便快捷，符合生物样品分析的测定要求，适用于丁酸氯维地平注射液在实验动物体内的药代动力学和组织分布研究。Beagle犬体内主要药代动力学参数和SD大鼠体内药物组织分布数据均表明丁酸氯维地平注射液受试制剂与参比制剂生物等效。

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前言

第一部分 丁酸氯维地平注射液在Beagle犬体内药代动力学研究

1 实验材料

1.1 实验药物

1.2 实验动物

1.3 实验试剂

1.4 实验仪器

2 实验方法

2.1 色谱/质谱条件

2.2血浆样品处理

2.3标准溶液的配制

2.4 方法学验证

2.5 丁酸氯维地平注射液在Beagle犬体内药动学研究

3实验结果

3.1 方法学验证结果

3.2 血浆样品测定每批标准曲线和质量结果

3.3 Beagle犬血药浓度测定结果

3.4药代动力学参数计算结果

3.5生物等效性统计结果

4讨论

4.1 质谱/色谱条件的优化

4.2 血样的采集和测定方法的优化

4.3 药代动力学参数的计算

5 小结

第二部分 丁酸氯维地平注射液在SD大鼠体内组织分布研究

1 实验材料

1.1 实验药物

1.2 实验动物

1.3 实验试剂

1.4 实验仪器

2 实验方法

2.1 色谱/质谱条件

2.2组织样品处理

2.3标准溶液的配制

2.4 方法学验证

2.5 丁酸氯维地平注射液在SD大鼠体内组织分布研究

3实验结果

3.1 方法学验证结果

3.2 组织样品测定每批标准曲线和质量结果

3.3预实验结果

3.4 组织中药物含量测定结果

3.5 不同时间点药物在各个组织中的含量分布比较

3.6 统计学分析结果

4讨论

4.1 色谱条件的优化

4.2 组织分布结果讨论

5小结

总结

参考文献

综述: 钙离子拮抗剂用于高血压治疗的研究进展

致谢

附录1