香烟烟雾提取物对人外周血单个核细胞前列腺素E2受体表达和功能的影响

摘要

目的:
　　研究香烟烟雾提取物（CSE）对人外周血单个核细胞（PBMC）四种前列腺素E2（PGE2）受体亚型（EP1、EP2、EP3和EP4受体）表达及功能的影响。
　　方法:
　　不同浓度的香烟烟雾提取物 CSE（0％、0.1%、1%、10%、20%）刺激体外培养的人外周血单个核细胞PBMC24小时后，分别用western blot和Real-time PCR技术检测细胞EP1、EP2、EP3、EP4四种PGE2受体亚型的蛋白和mRN A表达，ELISA检测培养上清液中TNF-ɑ含量；分别用10%CSE和不同浓度PGE2（10-5M，10-6M,10-7M，10-8M，10-9M）刺激体外培养的人外周血单个核细胞，用ELISA检测培养上清液中TNF-ɑ含量。
　　结果:
　　与对照组相比，不同浓度的CSE（0.1%、1%、10%）刺激PBMC后，EP1/EP3受体的蛋白及mRNA表达升高，EP2/EP4受体的蛋白及mRNA表达降低，CSE（0.1%、1%、10%、20%）刺激PBMC释放TNF-ɑ，随着CSE浓度的增大，PBMC培养上清液中TNF-ɑ的含量逐渐增加；PGE2呈浓度依赖性地增强CSE诱导的PBMC释放TNF-ɑ。
　　结论:
　　CSE刺激通过上调人外周血单个核细胞EP1、EP3受体的蛋白及mRNA表达，下调EP2、EP4受体的蛋白及mRNA表达促进TNF-ɑ的释放，进而影响疾病的发生发展。

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主要中英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

材料

一、主要试剂

二 、 主要设备

三、实验所用试剂配制

方法

一、CSE制备

二、PBMC细胞分离及培养

三、PBMC活力测定

四、实验分组

五、细胞总蛋白的提取

六、细胞总蛋白浓度的测定

七、westernblot检测PBMC EP受体的蛋白表达量

八、Real-time PCR检测PBMC EP受体的mRNA表达量

九、ELISA检测TNF-α含量

十、统计学分析

结果

一、PBMC细胞活力测定

二、PBMC EPs受体的蛋白表达

三、PBMC EPs受体的mRNA表达

四、CSE刺激使PBMC释放TNF-ɑ

五、PGE2呈浓度依赖性地增强CSE诱导的PBMC释放TNF-ɑ

讨论

结论

参考文献

综述: 前列腺素E2及其受体与呼吸系统疾病的关系

致谢