声明
摘要
1 前言
1.1 CRISPR/Cas9系统
1.1.1 CRISPR/Cas系统的发现
1.1.2 CRISPR/Cas系统的结构
1.1.3 CRISPR/Cas系统的作用机理
1.1.4 CRISPR/Cas系统的分类
1.1.5 CRISPR/Cas9基因编辑技术研究进展
1.1.6 CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用
1.1.7 CRISPR/Cas9系统的诱导性调控
1.2 miRNA-shRNA嵌套结构
1.2.1 RNA干扰技术
1.2.2 miRNA-shRNA嵌套结构的出现
1.3 p53基因概述
1.4 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 质粒
2.1.2 工具酶、试剂盒及其它试剂
2.1.3 引物序列
2.1.4 主要器材
2.1.5 缓冲液及主要试剂的配制
2.1.6 主要生物学分析软件
2.2 实验方法
2.2.1 载体骨架的构建
2.2.2 miRsh-sgp53的构建
2.2.3 RNA聚合酶Ⅱ类启动子调控的miRsh-sgp53载体的构建
2.2.4 细胞培养及转染
2.2.5 流式细胞仪分选阳性细胞
2.2.6 T7EN1酶切实验
2.2.7 sanger测序
3 结果与分析
3.1 RNA聚合聚合酶Ⅱ类启动子调控的miRsh-sgp53载体的构建
3.2 EF1a调控miRsh-sgp53盒内的sgRNA的表达情况
3.3 干细胞特异性启动子调控miRsh-sgRNA盒内的sgRNA的表达情况
3.4 miRsh-sgRNA盒差生脱靶效应情况
4 讨论
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文