红景天苷口服给药后药代动力学及在体肠吸收特性研究

摘要

红景天苷和酪醇是景天科红景天属（Rhodiola）植物中常见的两种酚类化合物，研究发现酪醇是红景天苷在大鼠体内主要代谢产物，二者具有抗疲劳、抗衰老、抗缺氧、抗辐射以及抗癌等多种药理作用，可用于多种疾病的预防和治疗。
　　论文对红景天苷在大鼠尿液中的代谢产物进行了分析，并预测了其可能的代谢途径。大鼠以100和500mg/kg计量灌胃给药红景天苷12h后，收集尿液样品，使用甲醇去除蛋白，分别使用超效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱和高效液相色谱串联四级杆离子阱质谱，对尿液样品中的代谢产物进行鉴定，基于分子量和相关碎片信息鉴定出8种代谢产物，红景天苷可通过葡萄糖醛酸化、硫酸化、去糖基化、羟基化、甲基化和去羟基化等途径进行代谢。
　　本研究优化了测定大鼠生物基质中红景天苷及其代谢产物酪醇的UPLC-MS/MS检测方法，并对样品测定方法进行了系统的方法学考证;利用所优化的方法考察了口服给药100mg/kg红景天苷后，红景天苷及酪醇在大鼠体内的组织分布、排泄以及肠吸收特性等代谢规律;未被完全吸收和利用的药物将通过尿液、粪便等途径进行排泄，可能对生物和环境造成危害，所以采用室内模拟不同温度和不同pH值条件对红景天苷水解特性的影响，以及不同光波长及光强对红景天苷光解特性的影响进行了研究，对深入了解红景天苷在水中的环境的行为具有一定的指导意义。
　　在选定的质谱条件下，待测物质可实现完全分离，生物样品中的内源性物质和代谢物不干扰红景天苷及酪醇的测定，红景天苷及酪醇的LLOD值为50ng/mL，LOD值为20ng/mL，标准曲线回归方程系数大于0.99、线性范围为50-2000ng/mL。精密度和准确度的试验结果表明，方法具有一定的准确性和较好的重复性，满足含量定量测定的要求。该方法简单、快速、准确、选择性强、线性范围宽，可应用于红景天苷及其代谢产物酪醇在大鼠体内药物代谢规律的研究。
　　口服给药红景天苷(100mg/kg)后，给药th和2h后红景天苷在肝组织中达到较高浓度，分别为1113.07±244.31ng/g和1088.87±165.66ng/g，之后的浓度迅速降低，直至4h几乎完全清除，其他组织中未检测到红景天苷的分布。给药后酪醇迅速分布于除脑组织外的大鼠各组织中，肾组织中酪醇的含量远远高于其他组织，其次为肝组织，再次为心组织;给药后th，脾中酪醇的含量远远低于其他组织，直至给药后4h，所有组织中酪酵的含量几乎彻底清除。
　　口服给药100mg/kg红景天苷72h后，23.80％的原药以尿液的形式排泄出体外，尿液中红景天苷的总积累量可达到4337.10±766.43μg;其次为经胆汁排泄，给药6h后，胆汁中红景天苷的累积量为4.65±0.13μg，占给药剂量的0.02％;粪便中未检测到红景天菅原药的存在。尿液中检测到了少量的代谢产物酪醇存在，排泄量为407.10±37.08μg，为给药剂量的2.35±0.28％。红景天苷和酪醇的总的排泄量占总给量的26.17％。
　　采用了大鼠在体肠灌流模型技术，分别对红景天苷和酪醇进行了大鼠在体肠吸收特性的研究，结果显示红景天苷在大鼠肠段不同部位吸收存在差异，其中空肠肠段吸收显著高于其他三个肠段，其吸收率为15.62％，校正肠壁渗透系数差异不显著，1.5h-2h期间的肠灌流液中空肠的累积吸收百分率最大，为32.19±3.12％，吸收速率常数k按照空肠、结肠、十二指肠和回肠的顺序依次递增，吸收半衰期T1/2则相反，分别为7.68±2.09d、6.17±0.16d、2.29±0.13d和1.76±0.34d;酪醇在大鼠各肠段不同部位吸收、校正肠壁渗透系数、吸收半衰期和速率常数差异均不显著，其吸收百分率在23.81％-32.81％之间，累积吸收百分率均在30.43±7.68％-42.96±5.85％之间均高于红景天苷在各肠段的吸收。
　　温度会促进红景天苷分子的水解，温度越高，水解越快;35℃和45℃条件下红景天苷的水解符合一级反应动力学方程，35℃条件下的红景天苷水解速率半衰期分别为0.117和10.04d，45℃条件下的红景天苷水解速率常数为和半衰期分别为0.069和5.92d;当水环境中存在弱酸时，可以显著的促进红景天苷分子的水解程度，红景天苷在pH5.4和pH7.4条件下的水解符合一级反应动力学方程，pH5.4条件下红景天苷的水解半衰期为5.29d，速率常数为0.131;pH为7.4条件下，其水解半衰期为11.18d，水解速率常数为0.062。在pH为8.0的环境中，各取样时间点的红景天苷样品均无显著水解现象。
　　在紫外区分别以254、308和365nm的光源对红景天苷溶液进行照射，试验结果可见，红景天苷不同光波长条件下的光解规律并不符合一级动力学方程。红景天苷在三个波长下的光解程度从大到小的顺序为:254nm＞308nm＞365nm，即辐射波长越短，越有利于红景天苷的光解;分别以照度为1800、4800、7200和11000Lx，模拟太阳光对水溶液进行照射，随着光照强度增加，红景天苷的光解程度相应逐渐提高。但是当光照48h后，红景天苷的光解程度并未随着光照时间的延长而增加，其最大的分解率即为35％，其余药物不能受光照影响而分解。且红景天苷受光照强度影响的分解过程也并不符合一级动力学方程。

目录

摘要

1 绪论

1．1 课题研究的背景

1．2 红景天苷和酪醇药理作用研究进展

1．2．1 红景天苷理化性质

1．2．2 红景天苷药理作用

1．2．3 酪醇的结构及药理作用

1．3 红景天苷药物代谢研究进展

1．3．1 样品处理方法进展

1．3．2 检测方法进展

1．3．3 药代动力学进展

1．4 药物肠吸收特性研究进展

1．4．1 酚苷类药物肠吸收特性研究方法

1．4．2 酚苷类药物肠吸收动力学研究现状

1．5 药物污染对水环境的影响

1．5．1 水环境中的药物来源

1．5．2 水环境中药物污染现状

1．6 本研究目的和意义

2 口服给药后红景天苷在大鼠体内代谢产物分析

2．1 实验材料

2．1．1 标准品

2．1．2 实验动物

2．1．3 实验试剂

2．2 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 动物实验

2．3．2 尿液样品的处理

2．3．3 检测条件

2．4 结果分析

2．4．1 红景天苷标准品碎片

2．4．2 红景天苷代谢产物鉴定

2．4．3 红景天苷在大鼠体内可能的代谢途径

2．5 本章小结

3 口服给药后红景天苷在大鼠体内组织分布

3．1 实验材料

3．1．1 标准品

3．1．2 实验动物

3．1．3 实验试剂

3．2 实验仪器

3．3 常用试剂配制

3．3．1 水合氯醛溶液

3．3．2 缓冲溶液

3．4 实验方法

3．4．1 动物实验

3．4．2 样品制备

3．4．3 方法验证

3．4．4 检测条件

3．4．5 数据分析

3．5 结果分析

3．5．1 方法验证

3．5．2 红景天苷及其代谢产物酪醇在大鼠体内的组织分布研究

3．6 本章小结

4 红景天苷口服给药后在大鼠体内的排泄

4．1 实验材料

4．1．1 标准品

4．1．2 实验动物

4．1．3 实验试剂

4．2 实验仪器

4．3 常用试剂配制

4．3．1 水合氯醛溶液

4．3．2 缓冲溶液

4．4 实验方法

4．4．1 动物实验

4．4．2 样品制备

4．4．3 方法验证

4．4．4 检测条件

4．4．5 数据分析

4．5 结果分析

4．5．1 方法验证

4．5．2 口服给药后红景天苷在粪便中的排泄

4．5．3 红景天苷口服给药后在尿液中的排泄

4．5．4 红景天苷口服给药后在胆汁中的排泄

4．6 本章小结

5 红景天苷与酪醇肠吸收特性

5．1．3 实验试剂

5．2 实验仪器

5．3 常用试剂配制

5．3．1 水合氯醛溶液

5．3．2 缓冲溶液

5．3．3 肠灌流液

5．4 实验方法

5．4．1 在体肠灌流模型的建立

5．4．2 样品制备

5．4．3 方法验证

5．4．4 检测条件

5．4．5 数据分析

5．5 结果分析

5．5．1 方法验证

5．5．2 红景天苷肠吸收特性研究

5．5．3 酪醇肠吸收特性研究

5．6 本章小结

6．1 实验材科

6．1．1 标准品

6．1．2 实验试剂

6．2 实验仪器

6．3 常用试剂配制

6．4 实验方法

6．4．1 水解和光解特性研究试验

6．4．2 样品制备

6．4．3 方法验证

6．4．4 检测条件色谱条件

6．4．5 数据分析

6．5．1 方法验证

6．5．2 红景天苷的水解特性研究

6．5．3 红景天苷的光解特性研究

6．6 本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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