胚胎植入前遗传学诊断的基础及临床应用研究——河南省首例PGD妊娠成功

摘要

植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis，PGD)是在胚胎着床之前即对其遗传物质进行分析，诊断胚胎是否有某些遗传物质异常，确定该胚胎是否适合移植的诊断方法。因此防止遗传病的发生，并避免选择性流产和多次流产可能造成身心的伤害以及伦理道德观念的冲突。目前已用于基因或染色体异常高风险夫妇的遗传学筛查。 PGD基本过程包括控制性超排卵，获得卵母细胞，常规IVF／ICSI受精，体外培养至6-10细胞期，活检胚胎取1．2个卵裂球或者胚胎发育到囊胚期取部分细胞，根据指征选择PCR或FISH方法进行相应的检测，再将2-3个经分析正常的胚胎移植入子宫。广义讲，PGD还包括受精前配子的检测，如X、Y精子的分离，极体的基因或染色体检测。 PGD技术的难度限制了其广泛的应用。其难点主要表现在以下三方面。1卵裂球活检；2单个卵裂球的固定；3单细胞分析技术：目前在PGD中常用的技术有单细胞聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，PCR)和荧光原位杂交(nuorescenceinsimhybridization，FISH)两种基本方法。单细胞PCR存在三个特异的缺点：PCR扩增效率、污染及等位基因脱扣(Alleledrop-out，ADO)，而FISH不仅可以进行胚胎植入前性别诊断，更在研究胚胎嵌合现象、染色体数目及结构异常方面具有PCR所没有的优势。因此FISH是PGD中一种重要检测方法。 目前关于单个卵裂球固定共有4种不同的固定方法：KCl法；Tween．20／HCl法；甲醇／冰醋酸法；Tween-20／HCl+甲醇／冰醋酸法。另外，PGD中关于FISH方法探针和固定的卵裂球细胞核的变性方法有两种：分开变性法和共变性法。四种固定方法和两种变性方法在各个生殖中心分别有使用，但其系统比较国内外尚未见报道。 本研究分为两部分。第一部分比较常用的四种单个卵裂球的固定方法和两种探针变性方法，旨在找到合适卵裂球固定方法及适合的FISH方法，并探讨该方法进行PGD的可行性。第二部分胚胎植入前遗传学诊断的临床应用。材料和方法 结论: 1、激光透明带打孔方法辅助下采用吸拉法进行胚胎活检是可行、有效的。 2、对不同的卵裂球固定方法进行比较，Tween-20／HCl+甲醇／冰醋酸法有较高的固定率和出信号率而均明显优于其它3种传统单细胞固定方法。 3、比较了分开变性和共变性杂交方法的出信号率，其差异无显著性。建立了适合本中心的荧光原位杂交方法并且成功的应用于临床PGD。 4、对6细胞以上的胚胎活检1个细胞组和活检2细胞组的囊胚形成率无显著性差异，故6细胞以上胚胎活检2个细胞将不影响胚胎的囊胚形成。 5、对7例高遗传风险患者进行胚胎植入前遗传学诊断，获得2例妊娠，使其实现生育健康后代的愿望，达到优生的目的。并为进一步开展PGD的基础研究和临床应用打下基础。经检索为河南省首例PGD妊娠成功。

目录

文摘

英文文摘

郑重声明

前言

第一部分四种卵裂球固定方法和两种探针变性方法的比较 材料与方法

第一部分四种卵裂球固定方法和两种探针变性方法的比较 结果

第一部分四种卵裂球固定方法和两种探针变性方法的比较 讨论

第二部分胚胎植入前遗传学诊断的临床应用——河南省首例PGD妊娠成功 材料与方法

第二部分胚胎植入前遗传学诊断的临床应用 结果

第二部分胚胎植入前遗传学诊断的临床应用 讨论

全文小结

参考文献

附 图

流式细胞术在胚胎植入前遗传学诊断中的应用

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