巨噬细胞集落刺激因子及白细胞介素-1β在体外受精-胚胎移植助孕中的作用分析

摘要

背景及目的:
　　 随着不孕不育夫妇的增多,人类辅助生殖技术(Assisted ReproductiveTechnology ART)也获得了广泛的应用,体外受精-胚胎移植技术(in VitroFertilization-embryo Transfer:IVF-ET)是其中的代表技术,随着生殖医学研究的不断深入,发现人类生殖过程不仅受神经内分泌系统的影响,而且还受到生长因子和细胞因子的调节。巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是造血系统细胞因子调控网络中的一个重要成员,在体内广泛分布,不单对体内多种疾病的发生发展有关,也参与卵泡、胚胎及滋养细胞等生殖系统的调控,对生殖过程产生重要影响。白细胞介素-1β(IL-1β)又称淋巴细胞激活因子,是最先发现的参与下丘脑-垂体-卵巢功能调节的因子,通过多种途径对生殖进行调节。至今为止,有关M-CSF与IL-1β对与激素及体外受精助孕的影响研究多集中在取卵日卵泡液及血清中的变化,结果还有争议。本研究旨在研究M-CSF及IL-1β在助孕过程中的变化及其与性激素的变化关系,在颗粒细胞上的表达及助孕结局关系,探讨它们的关系及评价其对卵子成熟,胚胎发育及着床的应用价值。
　　 研究对象与方法:
　　 1研究对象
　　 选取自2010年8月至2010年11月在郑州大学第一属医院生殖中心行常规体外受精.胚胎移植的不孕患者60名。按获卵数分低反应组20人(获卵数≤5枚)、中反应组20人(5<获卵数≤15)、高反应组20人(获卵数>15枚)。
　　 2.研究方法
　　 2.1患者血清及卵泡液M-CSF及IL-1β水平与妊娠结局的关系
　　 收集以下日期晨7:00空腹静脉血4ml:基础日(月经第2-4天),降调节后14天,注射促性腺激素针HCG日,取卵日(OPU日)、取卵后48小时(OPU48小时)及第一管清亮卵泡液,采用酶联免疫法检测检测M-CSF、IL-1β水平,采用电化学发光法检测其E2、LH及P激素水平。
　　 2.2 M-CSF及IL-1β在人卵颗粒细胞中的表达
　　 提取这60名患者(低、中、高反应组各20名)取卵日卵泡液中的颗粒细胞,行RT-PCR检测颗粒细胞上M-CSF级IL-1βmRNA的表达,然后采用免疫组织化学方法测量M-CSF及IL-1β蛋白的表达。
　　 3.结果:
　　 1.HCG日及取卵日妊娠组血清M-CSF,IL—1β水平(117.69±33.68 ng／l,107.84±36.86 ng／l;279.46±148.60 pg／ml,170.28±99.98 pg／ml)较非妊娠组高(79.40±38.37 ng／l,74.40±38.32 ng／l；178.30±82.29 pg／ml,126.30±110.91 pg／ml)(P<0.05),OPU48小时妊娠组血清IL-1β水平(63.34±33.04 pg／ml)较非妊娠组低(129.08±119.53 pg／ml)(P<0.05)。
　　 2.OPU日卵泡液中M-CSF水平(956.33±257.83 ng／l；704.84±339.07 ng／l)较血清中高(107.84±36.86 ng／l；74.40±38.32)(P<0.05)。
　　 3.HCG日、取卵日血清及卵泡液中IL-1β及M-CSF、E2、获卵数成正相关(r>0.67)。
　　 4.在促排卵过程中,从基础状态到HCG日,血清M-CSF、IL-1β、E2呈现由低逐渐升高的相似的趋势。
　　 5.HCG日血清M-CSF及IL-1β水平年龄<30岁组(121.41±23.37 ng／l；277.15±65.77 pg／ml)较年龄≥30岁组高(82.35±20.34 ng／l；177.99±61.62 pg／ml)(P<0.05)；M-CSF及IL-1β在Gn用量≤2250IU组(112.84±35.54 ng／l；263.40±132.65 pg／ml)高于Gn用量≥2250IU组(76.02±33.12 ng／l;178.72±84.47pg／ml)(P<0.01)。
　　 6.低反应组、中反应组、高反应组HCG日血清M-CSF及IL-1β水平呈逐渐增高趋势(49.95±15.62 ng／ml,98.57±23.85 ng／ml,137.14±18.47 ng／ml;122.39±46.80 pg／ml,220.32±89.54 pg／ml,325.30±136.43 pg／ml),差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 7.低反应组,中反应组,高反应组颗粒细胞的M-CSF及IL-1β的mRNA及蛋白表达呈逐步增高趋势(0.134±0.027,0.502±0.113,0.833±0.185;0.153±0.046,0.338±0.072,0.619±0.136),差异有统计学意义(P<0.015)。
　　 4.结论:
　　 1.HCG日及取卵日血清中M-CSF及IL-1β可促进胚胎着床,增加妊娠率；取卵后48小时较高水平IL-1β可抑制胚胎着床,降低妊娠率；
　　 2.血清M-CSF及IL—1β水平可以作为预测妊娠结局的指标。