STI571对阿尔茨海默病模型大鼠神经保护作用及其抗凋亡机制的研究

摘要

目的：近来研究显示干扰素信号途径分子在过度表达 c-Abl的AblPP/tTA转基因鼠脑组织神经元丢失病理机制中发挥重要作用，设计本实验的目的是研究阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD)模型大鼠非受体酪氨酸激酶c-Abl与信号传导及转录激活因子1（signal transducer and activator of transcription-1，STAT1）的表达情况，并观察选择性c-Abl抑制剂STI571对其表达的影响，为c-Abl成为AD潜在的治疗靶点提供更多的证据。
　　方法：健康雄性SD大鼠48只，随机分为4组，即假手术组、Aβ1-42组、假手术+STI571组、Aβ1-42+STI571组，双侧海马CA1区分别注射10mg凝聚态Aβ1-42(1μg·μg-1)或等体积的无菌PBS。造模前3天开始，分别给予腹腔注射STI571(30mg·kg-1)或者等体积生理盐水。Morris水迷宫对所有大鼠进行行为学测试。HE染色观察海马CA1区形态学改变。末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP缺口末端标记测定法(terminal deoxyribonucleotide transferase(TdT)-mediated dUTPnickendlabeling, TUNEL)试剂盒用来检测发生凋亡的神经元。免疫蛋白印迹、免疫组织化学染色和免疫荧光检测法检测海马组织c-Abl, p-c-Abl, STAT1, p-STAT1, caspase3 and cleaved-caspase3表达水平。
　　结果：Aβ1–42在海马CA1区的沉积导致大鼠学习和记忆能力的减退，海马锥体细胞凋亡，形态学改变和p-c-Abl, p-STAT1, cleaved-caspase3表达水平的升高。STI571治疗可改善海马的组织形态异常和学习记忆能力，通过下调c-Abl、STAT1和 caspase3的活性。
　　结论：上述结果表明，在Aβ1-42诱导的AD大鼠模型，Aβ1-42可激活c-Abl，异常活化的c-Abl可进一步激活干扰素途径信号分子STAT1从而引发神经变性，可能是通过caspase3依赖的凋亡途径，而STI571能改善这些异常事件的发生，提示c-Abl抑制剂对AD患者可能是一种很有前景的治疗干预药物。

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前言

材料与方法

1 材料

2 实验动物分组

3 AD动物模型的建立

4 给药方法

5 行为学测试

6 脑组织石蜡切片的制作

7 HE染色

8 免疫组化测定p-c-Abl及cleaved-caspase3的表达

9Western Blot法测定大鼠海马c-Abl、p-c-Abl、STAT1、p-STAT1、caspase3及cleaved-caspase3蛋白的表达

10 TUNEL法测定海马CA1区凋亡细胞率

11 免疫荧光染色观察p-S TAT1表达

12 统计学方法

结果

1 STI571能改善Aβ1-42诱导的AD模型大鼠认知功能损伤

2 STI571能改善Aβ1-42沉积导致的AD模型大鼠海马CA1区神经元凋亡和组织形态学异常

3 STI571对Aβ1-42诱导的AD模型大鼠海马组织中c-Abl、p-c-Abl、STAT1、p-STAT1、caspase3及cleaved-caspase3蛋白表达的影响

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:EphA4在神经变性疾病中的研究进展

致谢

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