肾系康方及其拆方亚组对系膜增生性肾炎模型大鼠肾组织中ICAM-1、IL-10影响的研究

摘要

目的:观察肾系康全方及其清热解毒、滋阴凉血、活血化瘀、益气四个拆方组对系膜增生性肾炎(MsPGN)大鼠尿蛋白定量及尿红细胞数、肾功能、肾组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、白介素-10(IL-10)以及细胞外基质(ECM)的影响,以明确全方及其四个不同治则拆方发挥作用的强弱及有无协同效应,并探讨其作用机理。
　　方法:本实验采用雄性SD大鼠为研究对象,以隔日牛血清白蛋白(BSA)灌胃并尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)及皮下分点注射完全氟氏佐剂和不完全氟氏佐剂的方法复制MsPGN模型。观察肾系康全方及其四个拆方对实验大鼠尿红细胞数、尿蛋白定量、血清生化指标的影响;免疫组化法检测肾组织中ICAM-1、IL-10含量并进行半定量分析;光镜观察各组大鼠ECM增生情况并进行半定量分析。
　　结果:①模型对照组24小时尿蛋白定量、尿红细胞数、血清肌酐(SCr)均较空白对照组显著升高;免疫组化法测得模型对照组大鼠肾组织中ICAM-1、IL-10显著高于空白对照组;光镜下观察到不同程度系膜增生的病理变化,说明MsPGN动物模型复制成功。②肾系康全方组可降低模型大鼠尿蛋白定量,拆方组中益气组、清热解毒组、活血化瘀组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05),而滋阴凉血组与模型对照组比较无显著性差异(P>0.05),提示除滋阴凉血组外的各治疗组均可不同程度降低模型组大鼠尿蛋白定量,按其作用由强到弱排序为全方组,清热解毒组,益气组,活血化瘀组。③肾系康方可降低模型大鼠尿红细胞数,全方组、滋阴凉血组、活血化瘀组及清热解毒组与模型对照组比较均出现显著性差异(P<0.05),而益气组与模型对照组比较无显著性差异(P>0.05),提示益气组在减少尿红细胞数方面不起主要作用,而其余各组对于减少尿红细胞数均有显著疗效,其作用由强到弱依次排序为全方组,滋阴凉血组,活血化瘀组,清热解毒组。④肾系康方可降低血肌酐(SCr),除外滋阴凉血组,其他各治疗组与模型对照组相比均有显著性差异(P<0.05),进一步比较各组间效果,提示清热解毒组与益气组作用相当(P>0.05),但前者均数较低,故各治疗组按其作用由强到弱排序为全方组,清热解毒组,益气组,活血化瘀组。⑤除益气及滋阴凉血外的各治疗组肾组织中ICAM-1含量较模型对照组显著减少(P<0.01),空白对照组、全方组、活血化瘀组之间无明显差异(P>0.05),活血化瘀优于清热解毒组(P<0.01),故各治疗组按其作用由强到弱排序为全方组,活血化瘀组,清热解毒组,益气组及滋阴凉血组可能不起主要作用。⑥肾系康全方组及四个拆方组均可上调肾组织中IL-10水平,与模型对照组相比有极显著性差异(P<0.01);拆方组中,活血化瘀组优于其它三组;清热解毒组、益气组均优于滋阴凉血组,前二者比较无显著性差异(P>0.05)。即各治疗组均能上调IL-10的表达,作用强度以全方组最强,其它依次为活血化瘀组,益气组,清热解毒组,滋阴凉血组。⑦肾系康方及各拆方组均可抑制ECM增生,以全方组效果最好;其次为清热解毒组与活血化瘀组,两组中前者较好;再则为益气组与滋阴凉血组,两者益气组稍佳。⑧对ICAM-1及IL-10进行简单相关分析,提示两者有显著的负相关(P<0.05),但相关关系并不密切(γ=-0.268);对两指标与ECM关系进行分析,证实了ICAM-1与ECM增殖有显著正相关(γ=0.843,P<0.05),但IL-10与之的负相关关系(γ=-0.095,P>0.05)有待进一步证实。
　　结论:①肾系康方的清热解毒、滋阴凉血、活血化瘀、益气四个拆方组在治疗MsPGN时各有所侧重,最终共同起到了降低尿蛋白定量,减少尿红细胞数,保护肾功能,降低肾组织ICAM-1水平,上调肾组织中IL-10的表达,抑制GMC增生及ECM增多的作用,从而改善肾脏病理形态,延缓肾小球硬化的进程,达到治疗作用。全方组集不同治则药物协同配伍,故疗效最好。②拆方研究提示:除滋阴凉血组外的各拆方组均可不同程度降低模型组大鼠尿蛋白定量,按其作用由强到弱排序为清热解毒组,益气组,活血化瘀组;益气组在减少尿红细胞数方面不起主要作用,而其余三组对于减少尿红细胞数均有显著疗效,其作用由强到弱依次排序为滋阴凉血组,活血化瘀组,清热解毒组。除外滋阴凉血组,其他三组均可降低模型大鼠SCr,按其作用由强到弱排序清热解毒组,益气组,活血化瘀组;活血化瘀组,清热解毒组均可降低肾组织中ICAM-1的含量,以前者为著;四个拆方组均有上调IL-10表达的作用,活血化瘀组疗效最好,其次为清热解毒组和益气组,两者作用相当,前者为优,再者为滋阴凉血组;四个拆方组均有抑制ECM增多的作用,清热解毒组优于活血化瘀组,其次益气组,再则滋阴凉血。③本实验提示肾小球ICAM-1表达水平的变化反映了肾小球内系膜增生和炎症程度的变化,随着IL-10表达上调可以观察到ICAM-1的表达下调及ECM减少。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

实验结果

1 实验大鼠的一般情况

2 各组大鼠尿蛋白定量的比较

3 各组大鼠尿红细胞数目的比较

4 各组大鼠血清BUN、SCr含量的比较

5 各组大鼠肾组织中ICAM-1表达的比较

6 各组大鼠肾组织中IL-10表达的比较

7肾组织中ICAM-1与IL-10的相关性分析

8各组大鼠肾小球ECM增殖的影响增殖情况的比较

9肾组织中ICAM-1、IL-10与ECM增殖的相关性分析

理论探讨

1 导师对MsPGN的认识

2 肾系康方的药物组成及方义

3 MsPGN大鼠模型的复制及现代医学对MsPGN的研究现状

4 实验结果分析及部分机理探讨

5 存在问题与展望

结论

致谢

参考文献

附录