基于抗炎活性的禹州漏芦生物学品质评价研究

摘要

本课题以菊科植物禹州漏芦药材为研究对象,筛选禹州漏芦有效溶剂萃取部位,构建禹州漏芦的抗炎药效部位 HPLC指纹图谱,在抗炎抑菌活性和活性部位化学指纹图谱的基础上,采用灰度关联分析法和后退法回归分析,探寻谱效间对应关系,建立一种即包括中药的化学成分,又能反映中药临床疗效的质量评价体系,以便对禹州漏芦进行更广泛、更系统的研究。主要研究工作如下：
　　目的：探讨禹州漏芦抗炎活性部位的药效与指纹图谱的关系,建立较为全面的禹州漏芦的品质评价体系。
　　方法：(1)采用小鼠耳肿胀实验对禹州漏芦药材有效部位进行筛选,并对不同产地禹州漏芦的抗炎活性进行测定。
　　(2)采用纸片法、牛津杯法测定禹州漏芦提取物及不同溶剂萃取物的抑菌环,并采用试管二倍稀释法测定各部位的最低抑菌浓度(MIC)。
　　(3)采用纸片法、牛津杯法、试管二倍稀释法测定禹州漏芦挥发油的体外抑菌活性。
　　(4)采用高效液相色谱法(HPLC)对不同产地禹州漏芦药材抗炎有效部位进行指纹图谱研究,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版软件进行分析,并采用灰度关联法和后退法对有效部位药效值和化学指纹图谱提供的峰面积进行回归,建立了禹州漏芦药材抗炎有效部位指纹图谱。
　　结果：(1)禹州漏芦抗炎有效药物剂量为中剂量组(2.5g·kg-1)最佳,石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位及水部位对小鼠耳肿胀的影响实验结果表明,氯仿高、低剂量组、乙酸乙酯低剂量组、正丁醇高、低剂量组、水部位低剂量组对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀均有一定的抑制作用,与模型组相比有统计学差异(P<0.01),其中氯仿萃取部位较其它部位具有更强的抗炎活性。
　　(2)禹州漏芦不同溶剂萃取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌的抑菌圈并不明显。对供试菌种的MIC测定结果显示,不同浓度醇提物中,以80%醇提物抑菌活性最强；不同极性溶剂萃取物中,以乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位对五种受试菌的作用强,氯仿部位和水部位作用弱。
　　(3)禹州漏芦挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌等均具有抑制作用,特别是对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有明显的抑制作用,其中枯草芽孢杆菌的 MIC 最低,达到1.047mg·mL-1。
　　(4)通过 HPLC 法对不同来源的禹州漏芦样品进行了分析,对色谱条件进一步优化并完成了方法学考察,运用“中药指纹图谱相似度评价软件”对禹州漏芦抗炎有效部位HPLC指纹图谱进行了相似度评价。对量化的指纹特征采用聚类分析法分析。
　　(5)在药效学与指纹图谱色谱峰面积量化数据的基础上,采用灰度关联和相关回归的分析方法,对试验结果进行分析。灰度关联分析法结果表明：禹州漏芦抗炎的药效作用是其内部各成分协同作用的结果,1-9 号峰代表的化学成分对“抗炎作用”贡献的大小顺序(以特征峰编号作为该特征峰所代表的化学成分名称)为 3>4>2>7>8>9>5>6>1。后退法相关回归结果表明：HPLC指纹图谱中的9个共有峰,对药效有显著贡献的变量有7个,所得回归方程为Y=0.980+0.126X2+0.693X3-0.341X4+0.608X5+0.651X7-0.996X8-0.468X9, (R2=0.856)。其中,2号、3号、5号、7号峰与药效呈正相关,而4号、8号和9号峰所代表化合物与药效呈负相关,其中7号峰为α-三联噻吩。
　　结论：(1)禹州漏芦氯仿萃取部位提取物具有强的抗炎活性。
　　(2)禹州漏芦提取物及挥发油具有一定的抑菌活性。
　　(3)禹州漏芦所具有的抗炎活性,是各成分综合作用的结果,所含的各化学成分间,具有相互协同和抑制作用。
　　(4)禹州漏芦抗炎有效部位药效指纹图谱的研究,初步探寻禹州漏芦抗炎作用的实效关系和作用机制,为禹州漏芦的临床新用提供依据,本项目为禹州漏芦质量标准的深入研究奠定了基础,并为其它药材质量标准的建立提供参考价值。

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前言

实验1 禹州漏芦抗炎作用的实验研究

材料与方法

结果

实验2 禹州漏芦提取物体外抑菌活性研究

材料与方法

结果

实验3 禹州漏芦挥发油体外抑菌活性研究

材料与方法

结果

实验4 禹州漏芦抗炎有效部位指纹图谱研究

材料与方法

结果

实验5 禹州漏芦抗炎活性药效指纹图谱的建立

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

附录