TGF-β1对静压力作用下PLGA支架上人牙龈成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

摘要

目的:①构建PLGA支架复合培养HGFs模型及力学加载模型，研究静压力对HGFs增殖的影响，探讨TGF-β1的表达与HGFs增殖间的关系;②研究TGF-β1对静压力作用下HGFs的COL-Ⅰ、MMP-1表达的影响。
　　方法:体外培养HGFs，接种于PLGA支架上，建立PLGA支架复合培养HGFs模型。通过收集上清液检测葡萄糖消耗量和乳酸脱氢酶含量，同时利用CCK-8检测细胞增殖活性，分析三维环境对HGFs生长增殖的影响;利用重力加载装置对HGFs施加静压力，大小为25g/cm2，加载时间分别为6h、24h、48h、72h组，对照组不加力(0h)，通过RT-PCR和ELISA技术检测各组HGFs中TGF-β1、COL-Ⅰ和MMP-1表达的变化;并应用TGF-β1抑制剂SB431542，检测静压力作用下TGF-β1对HGFs中COL-Ⅰ和MMP-1mRNA和蛋白表达的影响。
　　结果:①采用组织块培养法，经细胞形态学观察及来源鉴定，成功培养HGFs。荧光显微镜显示PLGA支架上有HGFs密集生长。②CCK-8结果显示:随着培养时间延长，二维和三维培养的HGFs数量均逐渐增多。第3d二维培养组达最高峰，三维培养组仍处于指数生长期。至第5d三维培养组达最高峰，而二维培养组已出现细胞数量下降(P＜0.05)。随后两组细胞生长速度均减慢。③葡萄糖消耗量和乳酸脱氢酶含量的检测结果显示:二维培养组第3d时葡萄糖消耗最高，乳酸脱氢酶最低，而三维培养组第5d时葡萄糖消耗最高，乳酸脱氢酶最低，随后两组葡萄糖消耗均缓慢减少，乳酸脱氢酶则开始逐渐升高。④CCK-8结果显示:与未加力组相比，在25g/cm2静压力作用下，除6h组外，其余各组差异均有统计学意义(P＜0.05)，24h组达到各组中最大值。随着加力时间的延长，细胞数量下降。加入抑制剂与不加抑制剂相比，24h组细胞数量明显减少(P＜0.05)。⑤RT-PCR和ELISA结果一致，显示:在25g/cm2静压力作用下，随着加力时间延长，TGF-β1、COL-ⅠmRNA和蛋白表达升高，24h达到各组中最大值，随着时间延长表达逐渐下降;而MMP-1mRNA和蛋白表达下降，24h其表达达到最低，随着时间延长表达逐渐升高;抑制TGF-β1后，COL-ⅠmRNA和蛋白的表达均随之下降，MMP-1mRNA和蛋白的表达均随之升高，24h组有统计学差异(P＜0.05)。
　　结论:①成功构建PLGA支架复合培养HGFs模型。与二维培养相比，HGFs在PLGA支架上可获得更强的细胞生长增殖能力及细胞活性，培养第5d时增殖活性最好。②25g/cm2的静压力促进HGFs的增殖，作用24h达到峰值，但随着加力时间延长，这种促细胞增殖的能力受到抑制，HGFs的增殖与TGF-β1的表达呈正相关。③25g/cm2的静压力可促进HGFs中TGF-β1、COL-ⅠmRNA和蛋白的表达，抑制MMP-1 mRNA和蛋白的表达，作用24h达到峰值，但随着加力时间延长，这种促表达或抑制能力会减弱。④25g/cm2静压力作用下，HGFs中的TGF-β1与COL-Ⅰ、MMP-1的表达有关，且在其表达过程中促进COL-Ⅰ的表达，抑制MMP-1的表达。

目录

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个人简历

英文缩略词表

摘要

前言

第一部分 PLGA支架复合培养HGFs模型的建立

1．主要试剂与仪器

2．实验方法

3 实验结果

4 讨论

5．小结

第二部分 TGFΝ-β1对静压力作用下PLGA支架上的HGFs增殖的影响

1．主要试剂与仪器

2．实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

第三部分 TGF-β1对静压力作用下PLGA支架上HGFs合成COL-Ⅰ和MMP-1的影响

1．主要试剂与仪器

2．实验方法

3 结果

4 讨论

5．小结

全文总结

参考文献

八、附图

综述 CTGF-β及其信号通路在牙周组织再生修复中的研究进展

临床病例报告

致谢

硕士期间发表论文