超高效液相色谱-串联质谱法在中药多组分含量分析及大鼠血浆中血药浓度测定的应用研究

摘要

随着医药国际交流和合作的日益广泛和深入,越来越多的人开始接受中药,这给我国中药的发展带来了新的机遇,使得中药现代化和全球化进程不断加快。中药的迅猛发展,使得它的研究、开发及生产离不开目前具有代表性与先进性的当代科学技术。中药质量控制也正由先前的单成分分析向现在的多成分同时分析转变,这成为了中药研究的热点之一。且中药的作用机理和物质基础的研究也是现代中药研究的热点之一。本文建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术在三类中药中多种复杂组分的含量分析及其大鼠血浆中血药浓度的测定的分析方法。主要研究内容如下:
　　1.建立了复方杏香兔耳风胶囊中原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、野黄芩苷、异绿原酸C、黄芩苷、木犀草素、芹菜素、白术内酯III和白术内酯I含量及其血药浓度同时测定的UPLC-MS/MS双内标分析方法。梯度洗脱的流动相采用含0.3％甲酸的水-甲醇,且在电喷雾电离(ESI)正、负离子切换模式下,采用多重反应监测模式(MRM)进行检测,10种成分的含量测定相关结果表明,原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、野黄芩苷、异绿原酸C、黄芩苷、木犀草素、芹菜素、白术内酯III和白术内酯I的线性范围分别为0.00300~24.0 mg/L,0.0170~2.00 mg/L,0.0150~30.0 mg/L,0.00400~30.0 mg/L,0.0105~24.0 mg/L,0.00300~30.0 mg/L,0.00300~5.00 mg/L,0.00600~5.00 mg/L,0.00150~4.00 mg/L,0.000600~0.900 mg/L,检出限分别为1.0、11、5.0、1.5、3.5、1.0、1.0、2.0、0.50、0.20μg·L-1,加标回收率为92.5%~106%,相对标准偏差均不大于3.1%。血药浓度测定结果表明,原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、野黄芩苷、异绿原酸C、黄芩苷、木犀草素、芹菜素、白术内酯III、白术内酯I的线性范围分别为0.0100~20.0 mg/L,0.0500~4.00 mg/L,0.0100~2.00 mg/L,0.0120~0.900 mg/L,0.0300~2.70 mg/L,0.0150~6.00 mg/L,0.0100~5.00 mg/L,0.0100~5.00 mg/L,0.00300~0.0900 mg/L,0.00500~0.0500 mg/L,检出限分别为1.0、11、5.0、1.5、3.5、1.0、1.0、2.0、0.50、0.20μg·L-1。低、中、高3种浓度的日内精密度RSD不大于2.5%,平均绝对回收率为80.5%~109%。该法快捷、准确、重复性好,已成功用于实际样品的含量及其大鼠血浆中的血药浓度测定。
　　2.建立了UPLC-MS/MS多内标分析方法同时测定安康欣胶囊中苦参碱、原儿茶酸、绿原酸、野黄芩苷、槲皮苷、黄芩苷、大豆苷元、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、木犀草素、淫羊藿苷、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、黄芪皂苷II、白术内酯III、白术内酯I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA的含量及其大鼠血浆中的血药浓度。以含0.3%甲酸的水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾电离(ESI)正、负离子切换模式下,采用多重反应监测模式进行检测,19种有效成分及4个内标在36 min内完全分离,且19种有效成分在一定的质量浓度范围内线性关系良好。该方法结果准确、简便快速、重复性好,可用于安康欣胶囊的质量控制及其大鼠血浆中的血药浓度测定。
　　3.以磷酸可待因、淫羊藿苷为内标,含0.3%甲酸的水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用UPLC-MS/MS联用法同时测定养阴清肺制剂中的腺苷、没食子酸、绿原酸、马钱苷、芍药苷、甘草苷、野黄芩苷、贝母辛、贝母素甲、橙皮苷、贝母素乙、黄芩苷、肉桂酸、蒙花苷、甘草酸、麦冬皂苷D、甘草次酸、齐墩果酸18种有效成分的含量及其大鼠血浆中的血药浓度。各组分在30 min内达到基线分离,18种成分的含量测定结果表明,腺苷的检出限为0.060μg·L-1,没食子酸为27μg·L-1,绿原酸为2.5μg·L-1,马钱苷为13μg·L-1,芍药苷为8.0μg·L-1,甘草苷为2.5μg·L-1,野黄芩苷为0.50μg·L-1,贝母辛为0.030μg·L-1,贝母素甲为0.60μg·L-1,橙皮苷为10μg·L-1,贝母素乙为0.0060μg·L-1,黄芩苷为0.50μg·L-1,肉桂酸为100μg·L-1,蒙花苷为0.60μg·L-1,甘草酸为2.5μg·L-1,麦冬皂苷D为1.5μg·L-1,甘草次酸为2.0μg·L-1,齐墩果酸为2.5μg·L-1,它们样品的加标回收率在95.9%~103%之间。血药浓度测定结果表明,18种成分的检出限分别为0.10、150、5.0、13、10、2.0、0.50、0.10、0.60、100、0.010、20、105、30、100、2.0、2.0、12μg·L-1。低、中、高3种浓度的日内精密度RSD不大于2.9%,平均绝对回收率在80.3%~105%之间。该方法选择性高、操作简单、灵敏度好,已成测定了养阴清肺制剂中18种有效成分的含量及其血药浓度。

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第一章 引言

1.1 超高效液相色谱-质谱联用技术概论

1.2 超高效液相色谱-质谱联用技术在中药质量控制中的应用

1.3 超高效液相色谱-串联质谱联用技术在中药药代动力学研究中的应用

1.4 本论文研究的目的和意义

第二章 UPLC-MS/MS双内标法同时测定复方杏香兔耳风胶囊中的10种有效成分及其血药浓度

2.1 实验部分

2.2 结果与讨论

2.3 小结

第三章 UPLC-MS/MS多内标法同时测定安康欣胶囊中的19种有效成分的含量及其血药浓度

3.1 实验部分

3.2 结果与讨论

3.3 小结

第四章 UPLC-MS/MS内标法同时测定养阴清肺制剂中的18种活性成分的含量及其血药浓度

4.1 实验部分

4.2 结果与讨论

4.3 小结

第五章 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文