毛葡萄中花青素的分离纯化及其与雀梅浆果花青素的抗氧化活性研究

摘要

花青素是广泛存在于植物体内的一类水溶性色素，是形成植物花和果实艳丽色彩的重要成分。花青素具有很高的抗氧化活性，对人类自由基的清除、延缓衰老、抗肿瘤等方面具有重要作用，在食品加工、医药、化妆品等行业有着巨大的应用前景。广西毛葡萄天然纯净、具备多种食疗保健功能，在食用、酿酒和药用等方面有商业开发的价值。本课题以广西毛葡萄为原料，对花青素的成分和含量、分离和纯化方法以及抗氧活性进行了研究，结果如下:
　　1.以毛葡萄发酵液为原料，减压浓缩、冷冻干燥得毛葡萄花青素粗品，pH示差法测得每100 g粗品含847 mg花青素。
　　2.液液萃取法从毛葡萄花青素粗品中萃取飞燕草色素，萃取条件为:样品溶解液pH值为1.0，石油醚、乙酸乙酯各萃取三次后，水相用乙酸乙酯和乙醇混合溶剂(10∶1，v/v)萃取三次，所得有机相液相色谱测得其纯度为81.3％。
　　3.DM-130大孔树脂对毛葡萄花青素的静态吸附是Langmuir等温吸附，且为准二级动力学吸附过程。
　　4.动态吸附与解吸实验确定动态吸附与解吸工艺条件为:上样液pH值2，上样浓度251.71μg·mL-1，上样体积80 mL，即8 BV，上样流速1.0 mL·min-1。解吸液为60％乙醇水溶液(含1％ HCl, v/v)，体积40 mL，即4 BV。经树脂纯化后，毛葡萄花青素色价提高了5.86倍。
　　5.HPLC-MS分析确定毛葡萄中含有四种花青素成分，主要的三种分别是芍药色素、飞燕草色素和天竺葵色素，其在总花青素中的含量分别为27.74％、56.94％和13.37％。
　　6.以三种不同的体外抗氧化活性方法研究了来源于毛葡萄和雀梅浆果两类花青素的抗氧化活性，结果显示两种来源的花青素对铁离子都有较强的还原能力，对羟基自由基和超氧阴离子自由基都有清除效果，且与浓度呈正相关。三种实验方法所得结果体现抗氧化能力的一致性，其大小顺序为:纯化毛葡萄花青素＞雀梅浆果花青素＞未纯化毛葡萄花青素。结果表明，DM-130大孔树脂对毛葡萄花青素确实有很好的纯化效果。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 天然食用色素的研究进展

1．2 雀梅藤及浆果简介

1．3 毛葡萄简介

1．4 花青素概述

1．4．1 花青素的结构

1．4．2 花青素的颜色

1．4．3 植物花青素的来源与鉴别

1．5 花青素的稳定性

1．5．1 稳定性的影响因素

1．5．2 提高花青素稳定性的方法

1．5．3 花青素的降解

1．6 花青素的提取分离和纯化方法

1．6．1 花青素的提取方法

1．6．2 花青素的分离纯化方法

1．7 花青素的定性与定量分析

1．7．1 花青素的定性分析

1．7．2 花青素定量分析

1．8 抗氧化能力检测方法

1．8．1 体外抗氧化检测方法概述

1．8．2 活性氧自由基清除能力

1．8．3 基于氢原子转移(HAT)的方法

1．8．4 基于电子转移(SET)的方法

1．8．5 金属离子鳌合能力法

1．8．6 抗氧化测定方法相关性分析

1．9 课题研究目的、意义和内容

1．9．1 研究目的和意义

1．9．2 主要研究内容

第二章 毛葡萄花青素的提取分离

2．1 引言

2．2 主要仪器、试剂和材料

2．2．1 主要仪器

2．2．2 主要试剂

2．2．3 实验材料

2．3 分析方法

2．3．1 色谱条件

2．3．2 标准曲线制备

2．3．3 仪器精密度和试验的重现性检验

2．4 毛葡萄中有效成分飞燕草色素的提取分离

2．4．1 样品预处理

2．4．2 总花青素含量测定

2．4．3 飞燕草色素提取条件探究

2．5 结果与讨论

2．5．1 总花青素含量

2．5．2 标准曲线制作

2．5．3 仪器精密度和试验重复性的检验结果

2．5．4 毛葡萄中有效成分飞燕草色素的提取分离

2．6 本章小结

第三章 DM-130大孔树脂分离纯化毛葡萄花青素

3．1 引言

3．2 主要仪器和试剂

3．3 实验步骤

3．3．1 DM-130大孔树脂的预处理

3．3．2 静态吸附和解吸实验

3．3．3 吸附等温线

3．3．4 吸附平衡和动力学

3．3．5 洗脱实验

3．3．6 动态吸附和解吸实验

3．3．6 DM-130大孔树脂对毛葡萄花青素的吸附率和解析率

3．3．7 毛葡萄花青素纯化前后色价的测定

3．3．8 HPLC-MS分析毛葡萄的花青素成分

3．4 结果与讨论

3．4．1 静态吸附与解吸

3．4．2 吸附等温线

3．4．3 吸附平衡和动力学

3．4．4 乙醇浓度对洗脱实验的影响

3．4．5 动态吸附与解吸

3．4．6 DM-130大孔树脂对毛葡萄花青素的吸附率和解析率

3．4．7 毛葡萄花青素纯化前后色价的比较

3．4．8 毛葡萄花青素成分的HPLC-MS分析

3．5 本章小结

第四章 毛葡萄与雀梅浆果花青素的抗氧化活性研究

4．1 引言

4．2 主要仪器和试剂

4．3 实验步骤

4．3．1 实验材料的准备

4．3．2 毛葡萄和雀梅浆果花青素的抗氧化活性研究

4．4 实验结果与讨论

4．4．1 铁离子还原能力(FRAP)

4．4．2 羟基自由基(·OH)清除能力

4．4．3 超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力

4．5 本章小结

第五章 结论和展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

附录

致谢

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