SIRT1-LXR/NF-κB可能是促使动脉粥样硬化斑块消退的重要信号通路

摘要

目的：建立U937泡沫细胞模型，研究SIRT1与泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块相关调控通路LXR-CCR7和促炎症信号NF-κB的相关性。
　　方法：体外培养人单核细胞株U937细胞，通过软脂酸钠和氧化型低密度脂蛋白构建泡沫细胞模型。实验分为空白对照组，转染试剂组，siRNA干扰组，高脂组、高脂+SRT1720组、高脂+SRT1720+干扰组。油红O对细胞进行脂肪染色，检测细胞内脂肪积累情况。以160nMPMA诱导 U937单核细胞，24h后细胞呈贴壁生长以后，进行 SIRT1 siRNA干扰操作，干扰48h后，进行 Western blot检验。然后在泡沫细胞模型中用 SIRT1激动剂 SRT1720使SIRT1高表达，高表达后再用 RNA干扰抑制SIRT1的表达，用Western blot法观察SIRT1、LXR及其下游靶分子CCR7和ABCA1的表达变化，以及炎症因子NF-κB和其下游靶分子TNF-α、IL-6的表达变化。
　　结果：观察细胞内脂肪积累的实验结果显示,高脂高胆固醇组诱导下的细胞内脂肪积累显著高于高糖对照组。Western blot实验结果表明siRNA对SIRT1蛋白表达有显著抑制作用，SIRT1蛋白表达显著下降。在泡沫细胞模型中，SRT1720使SIRT1蛋白表达水平升高，LXR和其靶分子CCR7蛋白水平无显著变化，而NF-κB以及其靶分子TNFα蛋白表达水平显著下降。在加入SRT1720的基础上再用RNA干扰抑制SIRT1的表达，结果表明RNA干扰使SIRT1的表达水平显著下降，LXR和其靶分子CCR7表达也随之下降；与此同时，NF-κB及其下游靶基因TNF-α表达水平显著升高。
　　结论：在高脂加氧化型低密度脂蛋白培养条件下,人单核细胞株内积累了大量的脂肪。我们的实验表明了在泡沫细胞中SIRT1是LXR-CCR7以及NF-κB信号通路的上游，并且有可能通过上调LXR-CCR7信号通路，抑制NF-κB炎症信号来参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出。为探究长寿基因SIRT1在动脉粥样硬化过程中调控机制提出了一个新的思路，为该病的防治提供了更理想的干预途径。

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第一章 前言

1.1研究意义及背景

1.2本课题的基金来源

1.3 研究目标与研究内容

1.4 本研究的创新点

第二章 材料方法

2.1 实验材料

2.2 技术路线

2.3 试验方法

2.4 统计分析

第三章 结果分析

3.1 软脂酸钠以及氧化型低密度脂蛋白对于人单核细胞系 U937 细胞内脂肪积累的影响

3.2 RNA干扰技术对 SIRT1 基因沉默表达的影响

3.3 在泡沫细胞模型中检验 SIRT1、ABCA1、LXR、CCR7、NF-κB及其下游靶分子蛋白水平的变化

第四章 讨论与展望

第五章 结论

参考文献

附录1 试剂配制

附录2 投稿文章

致谢

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