水飞蓟素和富硒蛹虫草对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的保护作用研究

摘要

目的:
　　本研究旨在评价水飞蓟素和富硒蛹虫草对雷公藤甲素致大鼠急性肝损伤的防治效果以及阐明两者的作用机制。
　　方法:
　　1.水飞蓟素对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的保护作用研究:使用雄性Wistar大鼠60只，随机分为5组，即正常组，雷公藤甲素造模组，水飞蓟素高、中、低剂量给药组(200、100、50 mg/kg)，正常组与模型组灌胃给予生理盐水七天，第八天分别腹腔注射生理盐水和雷公藤甲素(2mg/kg)。水飞蓟素给药组分别灌胃给予高、中、低剂量的水飞蓟素七天，第八天腹腔注射雷公藤甲素造模。造模结束24小时后对所有实验动物腹腔注射10％水合氯醛溶液使其麻醉，用普通采血管收集腹腔大动脉血，用于检测血清转氨酶和总胆固醇含量。放血至死后立即采集肝脏组织，一部分经甲醛固定后制作成HE染色病理切片、免疫组化切片以及TUNEL染色切片，一部分制成匀浆液用于检测抗氧化酶活力、脂质过氧化产物、炎症因子以及细胞色素C含量，一部分提取蛋白后检测磷酸化JNK、磷酸化p38、活化的caspase-3以及Nrf2蛋白表达水平。
　　2.富硒蛹虫草对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的保护作用研究:使用雄性Wistar大鼠84只，随机分为7组，即正常组，雷公藤甲素造模组，富硒蛹虫草对照组(1.5g/kg)，水飞蓟素阳性对照给药组(200 mg/kg)，富硒蛹虫草低剂量给药组(0.75g/kg)，富硒蛹虫草高剂量给药组（1.5g/kg），普通蛹虫草给药组(1.5g/kg)。正常组与模型组灌胃给予生理盐水七天，第八天分别腹腔注射生理盐水和雷公藤甲素（2mg/kg）。富硒蛹虫草对照组灌胃给予1.5g/kg富硒蛹虫草七天，第八天腹腔注射生理盐水。水飞蓟素给药组、高剂量和低剂量富硒蛹虫草给药组以及普通蛹虫草给药组分别灌胃给予200mg/kg水飞蓟素、1.5g/kg和0.75g/kg富硒蛹虫草以及1.5g/kg普通蛹虫草七天，第八天腹腔注射雷公藤甲素造模。造模结束24小时后对所有实验动物腹腔注射10％水合氯醛溶液使其麻醉，用普通采血管收集腹腔大动脉血，用于检测血清转氨酶和总胆固醇含量。放血至死后立即采集肝脏组织，一部分经甲醛固定后制作成HE染色病理切片、免疫组化切片以及TUNEL染色切片，一部分制成匀浆液用于检测抗氧化酶活力、脂质过氧化产物以及细胞色素C含量，一部分提取蛋白后检测活化的caspase-3以及Nrf2蛋白表达水平，一部分提取RNA后检测NQO1、HO-1和GCLC mRNA表达水平。最后采用石墨炉原子吸收光谱法检测富硒蛹虫草和普通蛹虫草中硒含量、高效液相联用质谱检测虫草素和硒代氨基酸的含量。
　　结果:
　　1.水飞蓟素能够显著下调由雷公藤甲素造成的血清转氨酶(AST、ALT、ALP、GGT)和总胆固醇含量增高，并且能够显著改善雷公藤甲素造成的肝脏组织结构变形、细胞坏死和炎性浸润的现象。另外，水飞蓟素能够显著恢复雷公藤甲素造成的抗氧化酶(SOD、CAT、GSH、GST、GSH-Px)活力下降和抑制MDA以及炎症因子(IL-6，IL-10、IL-1β、TNF-α)以及细胞色素C含量增高。水飞蓟素能够有效抑制磷酸化p38和磷酸化JNK蛋白、凋亡蛋白活化的caspase-3以及Bax的过表达，但不能提高Nrf2蛋白的表达。
　　2.富硒蛹虫草能够显著下调由雷公藤甲素造成的血清转氨酶(AST、ALT、ALP、GGT)和总胆固醇含量增高，明显改善肝组织病理学畸变，增加细胞内抗氧化酶(SOD、CAT、GSH、GST、GSH-Px)活力，减少MDA的堆积，并且能够上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平，抑制细胞色素C的释放、凋亡蛋白Bax以及活化的caspase-3蛋白的过表达从而降低细胞凋亡指数。另外富硒蛹虫草能够激活Nrf2蛋白来调控GCLC、HO-1和NQO1 mRNA的表达。
　　3.富硒蛹虫草中的硒、虫草素和硒代胱氨酸的含量均显著高于普通蛹虫草组。
　　结论:
　　水飞蓟素和富硒蛹虫草都能够显著增强体内抗氧化防御体系，控制氧化应激压力，抑制脂质过氧化反应来预防雷公藤甲素造成的肝细胞凋亡和肝功能失调，两者的作用效果与剂量呈明显的正相关性，其中高剂量的富硒蛹虫草与高剂量的水飞蓟素的作用效果相当，且显著优于同等剂量的普通蛹虫草。水飞蓟素的作用机制可能是通过调节促炎因子的过表达，抑制炎症信号通路和细胞凋亡通路，富硒蛹虫草则可能是通过激活Nrf2通路来提高抗氧化酶活力，两种药物对雷公藤甲素造成的急性肝损伤都具有良好的防治作用。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 雷公藤甲素对肝脏的损害机制

一、氧化损伤机制

二、免疫抑制机制

三、细胞凋亡损伤机制

第二节 水飞蓟素的肝保护研究进展

第三节 蛹虫草的肝保护研究进展

第二章 水飞蓟素预防雷公藤甲素致大鼠肝损伤的作用研究

第一节 水飞蓟素对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的预防效果评价

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第二节 水飞蓟素通过抗氧化途径预防雷公藤甲素致大鼠肝损伤

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第三节 水飞蓟素通过抗炎途径预防雷公藤甲素致大鼠肝损伤

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第四节 水飞蓟素通过抗细胞凋亡途径预防雷公藤甲素致大鼠肝损伤

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第五节 水飞蓟素对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的预防机制探讨

第三章 富硒蛹虫草预防雷公藤甲素致大鼠肝损伤的作用研究

第一节 富硒蛹虫草对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的预防效果评价

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第二节 富硒蛹虫草通过抗氧化途径预防雷公藤甲素致大鼠肝损伤

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第四节 富硒蛹虫草的肝保护有效成分分析

一、试验材料

二、试验方法

三、实验结果

第五节 富硒蛹虫草对雷公藤甲素致大鼠肝损伤的预防机制探讨

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢