基于抗肿瘤成分龙葵碱含量测定的龙葵果产地质量与煎服方法研究

摘要

目的:
　　近年来的药理实验与临床应用研究均表明龙葵果具有显著的抗肿瘤作用，其抗癌有效成分为龙葵碱（主要为澳洲茄碱与澳洲茄边碱），为了更好的利用龙葵果的药用价值，利用高效液相色谱法(HPLC)建立龙葵果药材中的龙葵碱（主要为澳洲茄碱与澳洲茄边碱）的含量测定方法，并测定了不同产地龙葵果中的龙葵碱的含量，在此基础上建立了龙葵果的HPLC指纹图谱分析方法，为该药材的鉴别及质量评价提供依据;为了探讨龙葵果的最佳应用（煎煮）方法，对不同煎煮时间的龙葵果煎煮液中澳洲茄边碱的含量进行了比较研究:并在此最佳煎煮时间下优化以龙葵为主药的龙葵承气汤的最佳煎煮方式。
　　方法:
　　(1)利用HPLC法对不同产地龙葵果中澳洲茄碱与澳洲茄边碱含量进行测定。将10组不同产地的龙葵果利用甲醇加热回流提纯，得到不同产地龙葵果供试液，利用HPLC法测量其中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量。对比各产地龙葵碱的含量，分析不同产对地龙葵果药用效果的影响。
　　(2)利用AgilentZORBAXSB-C18色谱柱(150×4.6mm，5μm)，以乙腈-0.3％磷酸为流动相进行梯度洗脱的HPLC法，分析10组龙葵果药材的HPLC图谱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2004A版）进行相似度评价，对龙葵的质量标准建立及药材鉴别提供可靠数据。
　　(3)利用HPLC法对龙葵果中澳洲茄边碱含量进行测量。将龙葵果进行不同时间的煎煮处理，后进行浓缩提纯，得到不同时间煎煮的龙葵果供试液，分别进行澳洲茄边碱的含量测量，通过测定结果最终确定龙葵果最佳煎煮时间。
　　龙葵承气汤为主药龙葵果与小承气汤合并组方化载而来。取组方:厚朴2g，枳实2g，白芍2g，柴胡2g，大黄1.6g，甘草1.3g，加15倍量水，浸泡30min，沸后煮30min，得缺龙葵果龙葵承气汤药液。通过制备龙葵果5g另煎液与缺龙葵果龙葵承气汤药，龙葵果5g后下与缺龙葵果龙葵承气汤药液煮液，龙葵果5g与缺龙葵果龙葵承气汤药液合并煎煮液与缺龙葵果龙葵承气汤阴性液得到4种不同煎煮方法药液，经浓缩提纯，得到4种龙葵承气汤供试液。采用HPLC法对4种龙葵承气汤供试液中澳洲茄边碱的含量进行测量。通过对比测量结果寻找龙葵承气汤最佳的煎煮方式，达到最优临床应用效果。
　　结果:
　　(1)利用HPLC法对龙葵果中龙葵生物碱（主要为澳洲茄碱与澳洲茄边碱）
　　进行测量，比较不同产地龙葵果中澳洲茄碱与澳洲茄边碱的含量，后以吉林产的鲜龙葵果澳洲茄碱(7.0806mg/g)、澳洲茄边碱(7.7705mg/g)含量最高，龙葵干果测量结果为吉林，安徽，辽宁含量较高，澳洲茄碱的含量分别为5.0812mg/g、4.1368mg/g、3.7721mg/g，澳洲茄边碱的含量分别为5.1146mg/g、4.2133mg/g、3.8497mg/g。
　　(2)建立了10批龙葵果药材的指纹图谱，其中共有峰12个，指认了澳洲茄碱、澳洲茄边碱2个特征峰分别为澳洲茄碱（7号峰，保留时间为22.72min）、澳洲茄边碱（8号峰，保留时间为23.41min），采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)对10批龙葵果样品的HPLC图谱和对照图谱的相似度进行评价表明相似度良好
　　(3)龙葵果单独煎煮30min、20min、10min时有效含量澳洲茄边碱分别为为2.37mg/ml、2.55mg/ml、2.81mg/ml;龙葵果另煎与小承气汤合并液中澳洲茄边碱含量为2.26mg/ml，龙葵果与小承气汤同时煎煮液中澳洲茄边碱含量为2.06mg/ml，龙葵果后下与小承气汤煎煮液中澳洲茄边碱含量为2.33mg/ml。
　　结论:
　　以上结果显示不同产地、鲜果与干果龙葵中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量存在明显差异，可能与生物遗传、生态环境、生长环境、采收时间、储藏方式等均有一定关系，应注意龙葵的的规范统一栽培、采收、加工以及采摘时的产地和龙葵果的新鲜程度对龙葵药材质量的影响;建立的龙葵果HPLC指纹图谱可为该药材的鉴别及质量评价提供更全面的参考;龙葵果单独煎煮10min时，有效成分澳洲茄边碱含量最高，说明10min为龙葵果最佳煎煮时间，龙葵承气汤（龙葵果后下）液中澳洲边碱含量最高，说明龙葵承气汤最佳煎煮方式为龙葵果后下，从而为龙葵果以及龙葵承气汤最佳煎煮方法提供了实验基础。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献综述

1．1 化学成分

1．1．1 生物碱类成分

1．1．2 皂苷类成分

1．1．3 非皂苷成分

1．1．4 其他成分

1．2 药理作用

1．2．1 抗肿瘤作用

1．2．2 抑菌和抗病毒作用

1．2．3 祛痰止咳平喘，保护肾脏的作用

1．2．4 心血管系统药理作用

1．2．5 抗炎与抗休克作用

1．2．6 对神经系统作用

1．3 检测方法

1．3．1 酸性染料比色法

1．3．2 薄层扫描法

1．3．3 高效液相色谱法

1．3．4 反相高效液相色谱法

1．3．5 超高效液相色谱法．

1．4 临床应用进展

1．4．1 癌症的应用

1．4．2 妇科疾病应用

1．4．3 呼吸系统疾病

1．4．4 消化系统疾病

1．4．5 泌尿系统疾病

1．4．6 其他疾病

1．5 栽培、采收与质量标准研究

1．6 结语

第二章 不同产地的龙葵果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定比较研究

2．1．2 试药

2．2 方法与结果

2．2．1 色谱条件

2．2．2 对照品溶液的制备

2．2．3 供试品溶液的制备

2．2．4 线性关系考察

2．2．5 精密度

2．2．6 稳定性

2．2．7 重复性实验

2．2．8 加样回收率实验

2．2．9 样品含量测定

2．3 讨论

第三章 龙葵果HPLC指纹图谱研究

3．1 仪器与试药

3．1．1 仪器

3．1．2 试药

3．2 方法与结果

3．2．1 色谱条件

3．2．2 溶液的制备

3．2．3 方法学考察

3．2．4 龙葵果样品的分析

3．2．5 龙葵果特征指纹图谱的建立

3．2．6 相似度评价

3．3 讨论

第四章 龙葵果煎煮时间与龙葵承气汤煎煮方式优化

4．1 仪器与试药

4．2．1 色谱条件

4．2．2 对照品溶液的制备

4．2．4 方法学考察

4．2．5 样品含量测定

4．2．6 龙葵承气汤的制备

4．3 结论

第五章 结语

5．1 结论

5．1．1 不同产地的龙葵果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定比较研究

5．1．2 龙葵果HPLC指纹图谱研究

5．1．3 龙葵果煎煮时间与龙葵承气汤煎煮方式优化

5．2 展望

参考文献

在校期间发表论文情况

致谢