抗FOC4放线菌的筛选及菌株DA07405、DA07408的分类鉴定与发酵优化

摘要

本论文从海南省高坡岭、尖峰岭原始森林、尖峰香蕉地、中沙、儋州植物园采集土壤样品，从广东省雷州市流沙镇采集新鲜海绵样品，用高氏一号合成培养基作为放线菌分离培养基，共分离到放线菌426株，以古巴尖孢镰刀菌4号小种(FOC4)作为指示菌，经筛选获得9株活性菌株，其中分离于海南儋州植物园土壤的菌株DA07405和DA07408活性最强。 结合培养特征与生理生化特征、16SrDNA序列分析，初步将菌株DA07405鉴定为Streptomycessp.DA07405，有待于DNA-DNA杂交进一步鉴定。菌株DA07408鉴定为橄榄产色链霉菌Streptomycesolivochromogenes。 通过发酵工艺优化，确定菌株DA07405最佳培养基配方及发酵条件为：葡萄糖1.0％，蔗糖0.5％，玉米粉0.5％，大豆粉0.75％，K2HPO40.05％，初始pH值7.0，种龄48h，接种量120％，200r/min培养5d，培养温度28℃，250mL三角瓶装液量75mL。确定菌株DA07408的最佳培养基配方及发酵条件为：葡萄糖1.0％，甘油1.5％，玉米粉0.75％，大豆粉0.75％，K2HPO40.05％，初始pH值7.0，种龄48h，接种量10％，200r/min发酵5d，培养温度28℃，250mL三角瓶装液量75mL。经过优化，菌株DA07405粗提物抑菌圈直径从优化前的15.0mm提高到22.0mm，DA07408抑菌圈直径从14.0mm提高到21.0mm。 对菌株DA07405和DA07408所产抗菌活性物质的稳定性做了初步研究，结果表明，两菌株所产的抗菌活性物质具有较好的热稳定性、日光稳定性和紫外光稳定性。菌株DA07405所产抗菌活性物质在pH1.0～9.0条件下，抑菌活性变化不大，但在pH＞9.0时不稳定。菌株DA07408所产抗菌活性物质在pH2.0～8.0条件下，抑菌活性变化不大，但在pH＜2.0和pH＞8.0时不稳定。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

1 序 言

1.1微生物农药的研究及应用

1.1.1微生物农药的特点

1.1.2微生物农药的分类

1.2香蕉镰刀菌枯萎病的危害与防治

1.2.1香蕉镰刀菌枯萎病的发生及危害

1.2.2香蕉镰刀菌枯萎病的防治

1.3本论文的目的与意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1试剂

2.1.2主要仪器

2.1.3供试菌株

2.1.4培养基

2.2实验方法

2.2.1样品的采集与处理

2.2.2抗FOC4放线菌的筛选

2.2.3放线菌的鉴定

2.2.4菌株DA07405和DA07408的发酵优化

2.2.5活性物质的稳定性研究

3结果与分析

3.1抗FOC4放线菌的分离与筛选

3.1.1抗FOC4活性菌株的分离与筛选

3.1.2抗FOC4活性菌株的遗传稳定性考察

3.1.3活性菌株粗提物的抗菌谱测定

3.2菌株DA07405和DA07408的分类鉴定

3.2.1形态学特征

3.2.2生理生化特征

3.2.3 16S rDNA序列测定

3.2.4系统发育分析

3.2.5菌株DA07405和DA07408的鉴定结果

3.3菌株DA07405和DA07408发酵工艺的优化

3.3.1培养基组成对菌株DA07405和DA07408抗菌活性的影响

3.3.2培养条件对菌株DA07405和DA07408抗菌活性的影响

3.4活性物质的稳定性研究

3.4.1热稳定性

3.4.2酸碱稳定性

3.4.3日光稳定性

3.4.4紫外光稳定性

4讨论

4.1放线菌的生态分布

4.2放线菌的分离

4.2.1土壤放线菌的分离

4.2.2海绵共生放线菌的分离

4.3抗FOC4放线菌的筛选

4.4菌株DA07405和DA07408的分类鉴定

4.5 DA07405和DA07408的发酵优化

5结论

参考文献

附 录

致 谢