aA晶体蛋白基因启动子与HSP16.3融合基因表达载体构建及其在大鼠晶状体上皮细胞的表达

摘要

目的：构建aA晶体蛋白基因启动子与HSP16.3融合基因表达载体paACP-HSP16.3，并检测其在大鼠晶状体上皮细胞中的特异性表达。
　　 方法：利用PCR技术从pET9d-HSP16.3中扩增HSP16.3基因，利用基因重组技术，构建pBluescript-HSP16.3，将pBluescript-HSP16.3和paACP-IRES2一EGFP进行双酶切回收的目的片段再连接构建特异性表达质粒，命名该质粒为pαACP-HSP16.3，通过酶切、PCR检测及测序证实其构建成功。将其注射入大鼠的晶状体球后，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因的表达，PCR检测融合基因在大鼠晶状体上皮细胞中HSP16.3基因mRNA的表达。
　　 结果：（1）构建的pαACP-HSP16.3质粒通过酶切图谱鉴定、PCR检测有435bp条带出现，通过测序显示所克隆的HSP16.3基因与基因库中的同种序列比较，核苷酸序列有100％的同源性。（2）在大鼠晶状体上皮细胞可观察到绿色荧光。（3）经PCR检测可见大鼠晶状体上皮细胞有外源性HSP16.3基因mRNA的表达。
　　 结论：成功构建了晶状体上皮细胞特异性表达载体paACP-HSP16.3，外源性HSP16.3基因在大鼠晶状体上皮细胞中有表达

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综述 热休克蛋白分子伴侣的研究现状

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