上海一株猪源隐孢子虫的虫种鉴定及遵义市人畜隐孢子虫感染的初步调查

摘要

目的:1、选择一种高效、简洁快速、价格合理的粪便微量DNA提取试剂盒。2、上海一株猪源隐孢子虫的虫种鉴定。3、初步了解遵义部分腹泻儿童、肿瘤病人及家畜的隐孢子虫感染情况及其流行特征。
　　 方法:1、用三种不同的试剂盒提取粪便DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率及巢式PCR产物等评价三种粪便微量DNA提取试剂盒。2、上海一份猪粪样品经改良-抗酸染色确定隐孢子虫感染,测量卵囊大小;提取DNA后经18SrRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA软件进行同源性和系统发育分析。3、采集遵义医学院附院儿科腹泻患者及肿瘤科病人、周边乡镇狗、牛、猪粪便标本共582份,改良抗酸染色检测隐孢子虫卵囊,所有样本提取DNA后经18SrRNA基因巢式PCR扩增。
　　 结果:1、Genmed试剂盒提取的DNA浓度最高、PCR产物条带最亮,但提取时间相对过长,价格相对过高。天根试剂盒提取的DNA纯度最高,DNA浓度及价格适中,提取时间最短。碧云天试剂盒提取的DNA纯度、浓度均不高且提取时间最长,但价格最便宜。2、上海猪粪样品经改良-抗酸染色后卵囊呈玫瑰红色、圆形,其大小为(4.90±0.83)μm×(4.52±0.73)μm;通过18SrRNA基因分析,上海猪源隐孢子虫与巴西-株隐孢子虫猪基因型Ⅱ(Cryptosporidiumsp.piggenotypeⅡ)同源性为100％,种系发育树上两者在同一分支。3、遵义采集的所有人畜粪便标本经改良抗酸染色,显微镜观察均未发现隐孢子虫卵囊;所有样本提取DNA经18SrRNA巢式PCR均未扩增出特异性片段。
　　 结论:1、Genmed试剂盒提取粪便微量DNA最灵敏;天根试剂盒提取DNA适于纯度要求较高的分子生物学研究。2、上海猪源隐孢子虫鉴定为隐孢子虫猪基因型Ⅱ(Cryptosporidiumsp.piggenotypeⅡ)。3、通过对遵义地区部分腹泻儿童、肿瘤病人及家畜粪便进行检查,尚未发现隐孢子虫感染。