ICA对ACC-M细胞株PI3K/AKT信号通路中AKT、p-AKT和NF-κB表达的影响

摘要

目的：研究 PI3K抑制剂 LY294002、ICA以及他们联合应用于 ACC-M细胞后， PI3K/AKT信号通路中AKT、p-AKT、NF-κB表达的变化，初步探讨ICA对涎腺腺样囊性癌的作用机制。
　　方法：将实验分为阴性对照组、阳性对照组(LY294002 IC50组)、ICA IC50组、ICA IC20+LY294002 IC10组、ICA IC40+LY294002 IC10组。1.用不同浓度的ICA、LY294002作用ACC-M细胞24h、48h、72h，用MTT法测定细胞的抑制率，选取药物作用的最佳时间并计算出该作用时间下的抑制浓度(IC10 IC20 IC25 IC30 IC40 IC50)；筛选出联用组药物浓度。2.采用普通光学倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化。3.流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。4.通过Western-blot检测各组细胞中AKT、p-AKT及NF-κB蛋白的表达情况。
　　结果：1.不同浓度的ICA(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)作用ACC-M细胞24h、48h、72h，发现ICA对ACC-M细胞具有显著的抑制增殖的作用(P<0.05)，且具有浓度依赖性和时间依赖性。不同浓度的LY294002(6.25μmol/l、12.5μmol/l、25μmol/l、50μmol/l、100μmol/l)作用ACC-M细胞24h、48h、72h，发现LY294002对ACC-M细胞具有显著的抑制增殖的作用(P<0.05)，同样具有浓度依赖性和时间依赖性。发现 ICA和 LY294002的最佳作用时间为48h，计算得到 ICA和LY294002的IC50分别为123.67μg/ml(185.2μmol/l)、30.88μmol/l，并检测到了联用组IC50的匹配浓度(ICA IC40+LY294002 IC10)。2.与阴性对照组相比，LY294002 IC50组、ICA IC50组、ICA IC20+LY294002 IC10组、ICA IC40+LY294002 IC10组的细胞密度降低，间隙变大，细胞逐渐由多边形变为梭形，细胞脱壁，一部分细胞漂浮在培养基中呈凋亡状态。3. ICA IC40+LY294002 IC10组作用ACC-M细胞后，细胞凋亡率较LY294002 IC50组、ICA IC50组、ICA IC20+LY294002 IC10组作用明显增加(P<0.05)。ICAIC20+LY294002 IC10组凋亡率要比ICA IC50组高，但比LY294002 IC50组低。4.与阴性对照组相比，LY294002 IC50组、ICA IC50组以及ICA IC20+LY294002 IC10组、ICA IC40+LY294002 IC10组中p-AKT蛋白表达明显下降，且ICA IC20+LY294002 IC10组、ICA IC40+LY294002 IC10组的p-AKT表达量均低于LY294002 IC50和ICA IC50两个单独用药组(P<0.05)。LY294002 IC50组中AKT、NF-κB蛋白表达与阴性对照组相比没有统计学意义(P>0.05)，而 ICA IC50组以及 ICA IC20+LY294002 IC10组、ICA IC40+LY294002 IC10组中AKT、NF-κB蛋白的表达与阴性对照组相比略降低(P<0.05)，且ICA IC20+LY294002 IC10组、ICA IC40+LY294002 IC10组中AKT、NF-κB的表达量低于ICA IC50组。
　　结论：ICA、LY294002均能够抑制ACC-M细胞的增殖，当ICA与LY294002联合使用时较两种药物单独作用更能有效地抑制ACC-M细胞的体外生长，其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路中AKT、p-AKT、NF-κB蛋白的表达而起作用。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 MTT法测定细胞的生长抑制率

2.2 细胞形态学变化

2.3 流式细胞术检测细胞凋亡

2.4 Western-blot测定AKT、p-AKT、NF-κB蛋白的表达

3 讨论

3.1 MTT法对实验组药物浓度的筛选

3.2 细胞形态学改变

3.3 各组药物对ACC-M细胞株增殖、凋亡的影响

3.4 各组药物对 ACC-M 细胞株 AKT、p-AKT、NF-κB蛋白表达的影响

4 结论

参考文献

综述: PI3K/AKT信号通路在肿瘤中的作用机制研究进展

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