EGCG对ACC-M细胞株PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、NF-κB表达的影响

摘要

目的：通过将EGCG与PI3K抑制剂LY294002分别、联合应用于ACC-M细胞，检测细胞的生存情况及Akt、p-Akt、NF-κB的表达情况，初步探讨EGCG对涎腺腺样囊性癌的作用机制。
　　方法：
　　1、MTT法测定不同浓度EGCG与LY294002分别作用ACC-M细胞24h、48h、72h的抑制率，计算药物半抑制浓度(IC50)；将实验分为阴性对照组、阳性对照组(LY294002 IC50)、EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组，测定48h细胞抑制率。
　　2、普通光学倒置显微镜观察各组药物作用48h细胞形态学变化。
　　3、流式细胞术检测各组药物作用48h细胞凋亡情况。
　　4、Western blot检测各组药物作用48h后细胞中Akt、p-Akt、NF-κB的表达。
　　结果：
　　1、不同浓度的EGCG(62.5μM、125μM、250μM、500μM)与不同浓度的LY294002(6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM)分别作用ACC-M细胞24h、48h、72h，与阴性对照组相比EGCG、LY294002对ACC-M对细胞的抑制作用具有统计学差异(P<0.05)。药物作用48h时 EGCG与 LY294002的IC50分别为156.28μM与30.88μM。阳性对照组、EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组的48h细胞抑制率分别为51.65％、51.48%、31.52%和56.65%。
　　2、细胞观察实验可见药物作用ACC-M细胞48h后，细胞数量减少、间隙增加，由多边形变为梭形，细胞脱壁，部分细胞漂浮在培养基中呈凋亡状态。
　　3、流式细胞术示所有用药组细胞凋亡率均高于阴性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；EGCG IC50组细胞凋亡率低于阳性对照组，而EGCG IC40+LY294002 IC10组细胞凋亡率高于阳相对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。
　　4、Western blot示，与阴性对照组相比，所有用药组的p-Akt表达降低(P<0.05)；EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组的Akt、NF-κB表达量均低于阴性对照组(P<0.05)。
　　结论：EGCG、LY294002均能抑制ACC-M细胞的增殖，EGCG IC40+LY294002 IC10对ACC-M细胞体外生长抑制效果最佳，其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、NF-κB蛋白的表达情况有关。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 MTT法测定细胞的生长抑制率

2.2 细胞形态学变化

2.3 流式细胞术检测细胞凋亡

2.4 Western-blot测定Akt、p-Akt、NF-κB的蛋白表达

3 讨论

3.1 EGCG与LY294002单用或联用抑制ACC-M细胞生长

3.2 EGCG与LY294002单用或联用诱导ACC-M细胞凋亡

3.3 EGCG与LY294002单用或联用对PI3K/Akt通路中Akt、p-Akt、NF-κB表达的影响

4 结论

参考文献

综述: EGCG抗肿瘤机制的研究进展

致谢

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