人参皂苷Rg1联合人羊膜间充质干细胞对顺铂所致小鼠急性肾损伤保护作用的研究

摘要

目的：探讨人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1，Rg1）联合人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells，hAMSCs）对顺铂所致小鼠急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）的保护作用及可能机制。 方法：采用胰酶和胶原酶消化法分离hAMSCs，传代培养的hAMSCs流式细胞术鉴定表型。单次腹腔注射顺铂制备急性肾损伤模型，尾静脉移植hAMSCs，腹腔注射Rg1（0.25 mg/kg/d），连续给药7天。观察动物一般状况，移植后第3、7天取材，血液生化检测肾功能，肾组织切片HE染色后显微镜下观察组织病理学变化，免疫组织化学检测肾损伤相关蛋白表达，透射电镜观察肾小管上皮细胞超微结构变化，免疫荧光和小动物活体成像检查hAMSCs的定植、分布。 结果：（1）差速贴壁法传代培养梭形hAMSCs至第3-5代，流式细胞仪检测显示， 90%以上的 hAMSCs 表达 CD90、CD105、CD44、CD73，不表达 CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR，hAMSCs胞浆内高表达波形蛋白；（2）AKI小鼠均出现了不同程度的体重下降、弓背和大便稀塘等表现；（3）移植后 3 天，AKI 组血清胱抑素 C (cystatin c, Cyc)明显较 control 组增高，与 AKI 组比较，Rg1 组和Rg1+hAMSCs组小鼠 Cyc明显降低（P<0.05），而hAMSCs组未见明显差异。移植后第7天， Rg1组、hAMSCs组及Rg1+hAMSCs组均较AKI组Cyc水平降低（P<0.05），Rg1+hAMSCs组比Rg1组和hAMSCs组Cyc下降更低（P<0.05）。除control组外，其他各组第7天时Cyc水平均较第3天降低。（4）移植后第3天，各组之间尿素和Scr水平无差异，第7天，与AKI组比较，其余4组小鼠尿素水平明显较低（P>0.05）；（5）移植后第3天，与control组比较，AKI组出现了典型的 AKI 病理学改变，肾小管上皮细胞坏死、脱落，大量管型形成，而 Rg1 组和Rg1+hAMSCs组AKI病理改变已有明显改善；移植后第7天时，Rg1组、hAMSCs组、Rg1+hAMSCs组肾小管损伤程度均较AKI组明显改善，Rg1+hAMSCs组最接近 control 组；（6）AKI组肾组织 HIF-1α、NAG 和 Kim-1 蛋白均高于 control 组（P﹤0.05），移植后第3 天Rg1组与hAMSCs+Rg1组HIF-1α蛋白表达高于AKI组，NAG和Kim-1蛋白却低于AKI组（P﹤0.05），hAMSCs组3种蛋白表达水平与AKI组相近。移植后第 7 天，除control 组外，其他各组 HIF-1α表达均较第 3天增加（P<0.05），而NAG和Kim-1蛋白表达水平较第3天降低，hAMSCs+Rg1组HIF-1α表达高于Rg1和hAMSCs组（P<0.05），而NAG和Kim-1蛋白表达低于Rg1和hAMSCs组。（7）移植后第7天电镜检查发现，AKI组线粒体损伤严重， Rg1、hAMSCs、Rg1+hAMSCs三组较AKI组损伤程度减轻明显，Rg1+hAMSCs组损伤最轻，而Rg1、hAMSCs组间无明显差异。（8）control组、AKI组与Rg1组肾组织未见MAB281阳性的绿色荧光，第3、7天时，Rg1+hAMSCs组绿色荧光细胞数明显多于hAMSCs组。（9）小动物活体成像显示，hAMSCs组及Rg1+hAMSCs组脾脏、肝脏、肺脏红色荧光信号最强，肾脏次之，且 Rg1+hAMSCs 组荧光强度高于hAMSCs组。 结论：人参皂苷Rg1联合hAMSCs移植治疗对顺铂所致AKI有明显保护作用，疗效优于单用Rg1或和hAMSCs，作用机制可能与Rg1促进hAMSCs在肾脏的归巢、定植，也涉及对肾小管上皮细胞中线粒体的保护，还可能与上调 HIF-1α 蛋白表达有关。

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