精氨酸酶Ⅰ和诱导型一氧化氮合成酶在肝细胞癌中的表达及其相关性研究

摘要

目的：从mRNA和蛋白质水平检测精氨酸酶Ⅰ（Arginase-Ⅰ，Arg-Ⅰ）及诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthetase， iNOS）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达情况，并探讨二者的表达与 HCC临床病理参数的关系及其在预后评估中的价值。
　　方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）技术，从mRNA水平上检测68例HCC、相应癌旁肝组织及8例正常肝组织中Arg-Ⅰ的表达情况；采用蛋白免疫印迹（Western Blot）方法在蛋白质水平上检测了23例HCC、相应癌旁肝组织中Arg-Ⅰ及iNOS蛋白表达情况；采用免疫组织化学染色（IHC）方法在蛋白质水平上分别检测了167例HCC、相应癌旁肝组织中Arg-Ⅰ、iNOS的表达情况；分析Arg-1和iNOS蛋白与HCC的临床病理参数之间的关系及其在预后评估中的价值；分析Arg-Ⅰ和iNOS蛋白表达的相关性，探讨Arg-Ⅰ及iNOS在HCC发生发展中的作用。
　　结果：
　　1、Real-time PCR结果发现Arg-1 mRNA在68例HCC中的相对表达量为0.0997（0.213），明显低于相应癌旁肝组织0.563（0.459）及正常肝组织1（0），差异有统计学意义（P＜0.01）。
　　2、蛋白免疫印迹实验亦证实了HCC中Arg-1及iNOS蛋白的平均表达水平明显低于癌旁肝组织（P＜0.01）。
　　3、免疫组化结果显示Arg-1和iNOS蛋白主要在癌旁和正常肝组织中表达，在HCC中低或不表达。半定量积分法检测Arg-1及iNOS在167例HCC中的蛋白表达免疫组化评分显著低于相应癌旁肝组织（P＜0.01）。在167例HCC中Arg-1的阳性表达率为44.9％，iNOS的阳性表达率为37.7%，二者表达呈正相关（r=0.214，P=0.002）。随着 HCC病理组织学分级的升高及分化程度的降低，Arg-1蛋白表达量逐渐减少（P＜0.01），iNOS蛋白表达量亦逐渐减少（P＜0.01）。HCC组织中Arg-1蛋白的表达与术前甲胎蛋白（α-fetoprotein， AFP）水平、微血管侵犯、术后是否复发等指标有关（P＜0.05）， iNOS蛋白的表达与微血管侵犯、包膜侵犯有关（P＜0.01），二者与HCC患者的性别、年龄、HBV感染、肿瘤数目、肿瘤直径及是否合并肝硬化均无关（P＞0.05）；
　　4、生存分析显示在HCC中Arg-1蛋白表达可以影响HCC患者术后无瘤生存时间（P＜0.05），但并不影响HCC患者术后总生存时间（P＞0.05）。iNOS蛋白表达与HCC患者术后无瘤生存时间和总生存时间均无关（P＞0.05）。
　　结论：
　　1、在HCC组织中Arg-1mRNA水平均明显低于相应癌旁肝组织和正常肝组织。
　　2、在HCC组织中Arg-1和iNOS蛋白表达水平明显低于相应癌旁肝组织。Arg-1与iNOS的表达呈明显正相关，二者的表达缺失/下降与肿瘤低分化、侵袭转移有关。
　　3、Arg-1基因表达的缺失或下调可能参与了HCC的发生和发展。iNOS在HCC中的低表达进一步协同了Arg-1低表达的促进肿瘤生长的作用。
　　4、Arg-1、iNOS或可成为评估HCC分化程度的候选蛋白标志物。
　　5、检测Arg-1蛋白的表达有助于评估HCC患者术后的复发风险。

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 结果判定

4 统计学分析

结果

一、 Arg-1在HCC、相应癌旁肝组织中的表达及其预后分析

1 Arg-1 mRNA在HCC、相应癌旁和正常肝组织中的表达

2 Arg-1 蛋白在HC C及相应癌旁肝组织中的表达

3 Arg-1蛋白表达与HC C临床病理特征的关系

4 Arg-1蛋白表达水平在HC C预后评估中的价值

二、 iNO S在HCC、相应癌旁肝组织中的表达及其预后分析

1 iNOS 蛋白在HCC、相应癌旁肝组织中的表达

2 iNOS蛋白表达与HCC临床病理特征的关系

3 iNOS蛋白表达水平在HCC预后评估中的价值

三、HCC组织中Arg-1和iNOS蛋白表达的相关性分析

讨论

一、 Arg-1在HCC组织中表达的临床病理意义及其与HCC病人预后的关系

二、iN OS在HCC组织中表达的临床意义及其与HCC病人预后的关系

三、HCC组织中Arg-1与iN OS蛋白的关系

结论

参考文献

致谢

综述