莲花蜂花粉多糖的提取、分离及生物活性的研究

摘要

蜂花粉是纯天然的保健品之一，被誉为全能营养库。多糖是蜂花粉重要有效成分之一，具有较好的潜在开发价值。本文对莲花蜂花粉多糖的提取、分离、初步纯化及生物活性进行了研究，结果如下： 1.在超声波破壁的基础上研究了水提法提取莲花蜂花粉多糖的条件，在单因素试验的基础上，根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，选取料液比、浸提时间和浸提温度3个因素的3个水平进行响应面分析，建立多糖得率的二次回归方程，得到提取工艺的优化组合条件。试验结果表明：料液比、浸提时间和浸提温度对莲花蜂花粉多糖得率都有显著影响，当提取工艺条件为料液比1：9.4，时间2.4 h，温度81.6℃，浸提2次时，多糖得率达到极大值。此条件下莲花蜂花粉多糖得率预测值为1.2201％，验证值为1.2317％。 2.不同体积乙醇沉淀莲花蜂花粉多糖效果的研究表明，乙醇体积为多糖液体积的3.5倍时，沉淀效果最好。通过对五种不同脱蛋白方法效果的比较，确定胰蛋白酶+Sevage法为莲花蜂花粉多糖提取时脱蛋白的最佳方法，蛋白清除率为82.51％。多糖经Sephadex G-75的洗脱，出现两个洗脱峰，其中分子量较大的含量少于分子量较小的。 3.根据Fenton反应体系，通过对莲花蜂花粉多糖清除羟自由基试验的研究，可知当精制莲花蜂花粉多糖和粗多糖质量浓度同为2.5 mg/mL时，羟自由基的清除率分别达64.58％和56.82％；采用邻苯三酚自氧化测定法，通过对莲花蜂花粉多糖清除超氧阴离子自由基试验的研究，可知当精制多糖和粗多糖质量浓度同为1.3 mg/mL时，超氧阴离子自由基清除率分别达到58.28％和52.52％。表明莲花蜂花粉多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基都具有较好的清除作用，且初步纯化后多糖的清除效果比粗多糖好。 4.通过对莲花蜂花粉多糖降血脂作用的研究，得知大鼠灌胃给药低(150 mg/kg.d)、中(300 mg/kg.d)、高(600 mg/kg.d)剂量的莲花蜂花粉多糖，能显著降低试验性高脂血症大鼠血清中的总胆固醇TC含量，但对大鼠血清中甘油三脂TG和高密度脂蛋白HDL-C含量作用不明显。表明莲花蜂花粉多糖有一定的降血脂功效。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1多糖的研究概述

1.1多糖的来源

1.2多糖提取工艺的研究进展

1.3多糖的分离纯化

1.4多糖的结构分析

1.5多糖生物活性的研究进展

1.6多糖构效关系的研究进展

1.7花粉多糖的研究现状

2本研究的目的和意义

第二章 莲花蜂花粉多糖提取工艺的优化

1前言

2试验材料、试剂及仪器

2.1材料与试剂

2.2主要仪器设备

3测定方法

3.1花粉水分含量的测定

3.2脂肪的测定

3.3灰分的测定

4试验方法

4.1多糖含量的测定—苯酚-硫酸法

4.2原料预处理

4.3破壁莲花蜂花粉的制备

4.4水提醇沉法提取莲花蜂花粉粗多糖的技术路线

4.5莲花蜂花粉多糖提取率的计算

5结果与分析

5.1水分的含量

5.2脂肪的含量

5.3灰分的含量

5.4葡萄糖标准曲线

5.5单因素试验结果与分析

5.6 响应面试验结果与分析

6本章小结

7讨论

第三章 莲花蜂花粉多糖的初步分离纯化

1 引言

2试验材料、试剂及设备

2.1材料和试剂

2.2主要仪器设备

3试验方法与步骤

3.1蛋白质测定方法

3.2莲花蜂花粉粗多糖乙醇沉淀分离试验

3.3莲花蜂花粉粗多糖脱蛋白工艺的探讨

3.4 Sephadex G-75纯化多糖试验

4结果与分析

4.1蛋白质含量测定的标准曲线

4.2莲花蜂花粉粗多糖乙醇沉淀分离试验结果与分析

4.3莲花蜂花粉粗多糖脱蛋白试验结果与分析

4.4 Sephadex G-75纯化多糖试验结果与分析

4.5莲花蜂花粉多糖部分理化性质测定结果

5本章小结

6讨论

第四章 莲花蜂花粉多糖生物活性的研究

1 引言

2试验材料、试剂与设备

2.1试验材料

2.2试验试剂及仪器

3试验方法及步骤

3.1莲花蜂花粉多糖清除自由基试验

3.2莲花蜂花粉多糖降血脂试验

4试验结果与分析

4.1莲花蜂花粉多糖清除自由基的试验

4.2莲花蜂花粉多糖对大鼠降血脂作用的研究

5本章小结

6讨论

第五章总结

参考文献

致谢