实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（fqRT-PCR）法检测外周循环肺癌细胞（CTCs）的临床应用研究

摘要

由于传统的RT-PCR法最多只能达到半定量的程度，因此它很难区分正常组织中靶基因的基础表达水平与癌相关组织中增高的表达水平，从而产生假阳性。本实验旨在应用一种定量检测的方法(荧光定量逆转录-聚合酶链反应法，fqRT-PCR)来检测外周血中循环癌细胞(CTCs)，以便为动态监测疾病、观察疗效及早期诊断等创造条件。本实验中，运用fqRT-PCR法定量检测了术前、术中及术后肺癌病人外周血中癌细胞的存在状况，以评价手术操作促进癌细胞入血的可能性。同时分析了围手术期CTCs的变化与常见临床病理指标间的关系。在实验中，以CK19mRNA作为检测标志物，运用实时荧光定量RT-PCR法检测放射治疗前后肺癌患者CTCs的改变，评估其作为新的疗效评定标准的可行性。本实验旨在观察化疗期间肺癌患者CTCs的变化，以寻找新的疗效评判标准，同时检测患者化疗前后外周血淋巴细胞(PBL)中mdr1表达，探讨其与化疗疗效的相互关系。肿瘤患者术后微转移的存在使得全身辅助性治疗显得很重要。

目录

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GLOSSARY OF ABBREV I AT I 0NS

ABSTRACT

Part ⅠEva Iuati on Of The Di agnostic Test

Part ⅡObservation Of CTCs In Patients With Non-Small Cell Lung Cancer In Peroperative Period

Part Ⅲ Fluctuati on Of CTCs In Lung Cancer Patients Before And After Radiotherapy

PART Ⅳ Comparison Of CTCs In Patients With Lung Carcinoma Before And After Chemotherapy

PartⅤ Observation Of CTCs Based On Postoperative Chemotherapy In Patients With Non-Smal I Cel I Lung Cancer

REFERENCES

SUMMARY

ACKNOWLEDGEMENTS

英文缩略词

第一部分诊断实验的评价

1前言

2材料与方法

3结果

3.1准确性评价

3.2重复性(Reproducibility)评估

3.3 FQ-RT-PCR相关曲线

3.4 临床检测结果

4讨论

4.1有关检测标志物

4.2有关检测方法

第二部分非小细胞肺癌患者围手术期CTCs的动态观察

1前言

2材料与方法

2.1临床资料

2.2主要实验试剂及仪器(见第一部分)

2.3实验过程

2.4统计学处理

3结果

3.1围术期外周血中CK19测值变化趋势

3.2 CK19测值与常用临床病理参数间的关系

3.3 CEA诊断实验评价

3.4围术期外周血CEA mRNA浓度变化趋势

3.5 CEA mRNA水平与常见临床病理参数间的关系

3.6 术前外周CK19/CESA阳性率分析

4讨论

4.1临床病理相关性分析

4.2肺血管结扎顺序(SOVL)对癌细胞入血的影响

4.3本研究的创新性

4.4今后研究方向及需解决的问题

5结论

第三部分放射治疗前后肺癌患者CTCs的变化

1前言

2材料与方法

2.1临床资料

2.2主要实验试剂及仪器(详见第一部分)

2.3实验过程（详见第一、二部分）

2.4统计学分析

3结果

3.1放疗前后CK19mRNA水平的变化

3.2放疗前后CK19mRNA水平变化与临床病理参数的关系

3.3放疗前后CK19mRNA水平变化与瘤负荷改变间的相关分析

3.4放疗前后CK19mRNA表达阳性率

4讨论

第四部分化学治疗前后外周循环肺癌细胞的对比研究

1前言

2材料与方法

2.1临床资料

2.2主要实验试剂及仪器(详见第1部分)

2.3实验过程(详见第1部分)

2.4统计学分析

3结果

3.1化疗前后外周血CK19 mRNA水平变化

3.2化疗前后PBL中mdr1 mRNA水平变化

3.3化疗期间阳中CK19 mRNA水平与常见临床病理参数间的关系

3.4化疗前后CK19与mdr1 mRNA水平变化的相关性分析

3.5化疗期间SCLC与NSCLC患者PBL中mdr1 mRNA水平比较

3.6化疗前后CK19 mRNA阳性率比较

4讨论

4.1化疗过程中动态监测外周血CTCs的意义

4.2动态监测化疗前后外周血淋巴细胞(PBL)中mdr1 mRNA的意义

第五部分非小细胞肺癌患者术后化疗过程中CTCs的改变

1前言

2材料与方法

2.1临床资料

2.2主要实验试剂及仪器(见第一部分)

2.3实验过程(见第一部分)

2.4统计学分析

3结果

3.1化疗过程中各时点CK19基因表达水平变化趋势分析

3.2化疗期间阳性率比较

3.3有无临床转移/复发时CK19 mRNA表达水平比较

4讨论

4.1定期监测CTCs可作为判定术后辅助治疗疗效的重要标准

4.2术后动态监测CTCs有助于预测肺癌复发或转移

4.3化疗难以完全消灭CTCs,需寻找新的治疗方法或靶点

全文小结

文献综述

致谢

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