MicroRNA沉默卡氏肺孢子菌主要表面糖蛋白基因对大鼠卡氏肺孢子菌肺炎的治疗作用

摘要

目的：探讨靶向卡氏肺孢子菌(pneumocystis carinii，PC)主要表面糖蛋白基因(major surface glycoprotein gene，MSG)上游保守序列(upstream conserved sequence，ucs)的microRNA重组质粒对大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(pneumocystis carinii pneumonia，PCP)的治疗效果。
　　方法：大鼠尾部编号，建立大鼠PCP模型，按简单随机抽样法分成5组：microRNA重组质粒治疗组(M组)、磺胺药物治疗组(H组)、感染对照组(C1)、空载体质粒对照组(C2)和生理盐水对照组(C3)，其中M组和C2、C3组经尾静脉分别注射含有PC MSG-UCS基因的microRNA干扰序列表达载体(pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR)、空载体和生理盐水，H组用磺胺药物灌胃治疗，C1组不做处理。1周后在油镜下计数吉姆萨(GMS)染色肺组织液印片中孢子菌包囊数，在光镜下观察HE染色肺部病理改变，用ELISA法检测大鼠血清中IL-10和INF-γ的浓度，RT-PCR法检测肺组织中PC MSG-UCS的mRNA表达水平，并用扫描电镜，观察PC的超微结构。
　　结果：GMS染色示M组肺孢子菌数和H组无统计学差异(p>0.5)，但少于C1、C2和C3组(p<0.05)；HE染色示M组和H组肺部炎症较C1、C2和C3组轻；ELISA法示M组IL-10和INF-γ的浓度和H组无统计学差异(p>0.05)，M组和H组的IL-10的浓度显著低于C1、C2和C3组(p<0.05)，INF-γ的浓度显著高于C1、C2和C3组(p<0.05)，RT-PCR证实M组大鼠PC-MSG的mRNA水平和H组无统计学差异(p>0.5)，显著低于C1、C2和C3组(p<0.01)；电镜示M组和H组PC包囊表面均出现破损，C1、C2、C3组未发现破损。
　　结论：microRNA重组质粒-pPC-UCS对大鼠PCP有明显的治疗作用，开拓了PCP基因治疗的新策略。