1.人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响；2.人参皂苷Rg1联合阿糖胞苷对白血病细胞KG1α凋亡的影响

摘要

第一篇:人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响
　　目的:
　　免疫系统衰退是机体衰老的重要表现，也是衰老生物学研究的重要课题。胸腺是人体重要的中枢免疫器官，是T细胞发生与成熟场所，也是机体衰老发生最早最明显的免疫器官，如何延缓胸腺衰老值得高度重视。
　　人参是中医临床“补气”要药，有几千年的临床应用历史。现代医学研究证明，人参具有延缓衰老、调节免疫、抗肿瘤、神经保护等作用。本课题组既往研究证明，人参皂苷Rg1既能够延缓造血干/祖细胞的衰老，并可以诱导白血病K562细胞株的衰老，说明人参有“双向调控”或“扶正祛邪”作用。人参皂苷Rg1是否能够延缓免疫器官衰老,还尚未见报道。
　　本实验通过构建D-半乳糖制大鼠衰老模型，研究人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响,旨在阐释人参皂苷Rg1延缓免疫器官衰老的机理，为天然药物有效成分延缓机体衰老提供新的思路和方法。
　　方法:
　　将大鼠随机分为四组；衰老模型组（ D），皮下注射D-gal（120mg/Kg/d)qd×42；（2）Rg1衰老模型组(DR)，注射D-gal时间与剂量同衰老模型组,第15d起腹腔注射Rg1（20mg/Kg/d）qd×28；（3）正常对照组(C)，注射等时等剂量的生理盐水；（4）Rg1对照组(R)，注射等剂量的生理盐水（qd×14），第15d起腹腔注射Rg1（同Rg1衰老模型组）。模型复制和给药注射完成24h，取胸腺观察组织形态学，计算胸腺皮/髓质比例，冰冻切片SA-β-Gal染色分析胸腺细胞衰老，免疫组化及免疫荧光分析胸腺组织内细胞因子表达情况，CCK-8法及CFSE流式细胞术检测大鼠胸腺细胞对刀豆蛋白(Con A)反应增殖能力，流式细胞术分析细胞周期及凋亡，ELISA检测细胞因子的含量，Western blotting检测胸腺组织衰老相关蛋白P53,P21,Rb的表达。
　　结果:
　　1.D-半乳糖能够显著提高胸腺细胞SA-β-Gal染色阳性率、凋亡比例及G0/G1期比例，降低其对刀豆蛋白A的增殖反应能力、胸腺皮/髓质比例、胸腺指数及细胞因子的分泌量，使衰老相关蛋白的表达明显增加。
　　2.人参皂苷Rg1能够明显降低D-半乳糖致衰老大鼠胸腺细胞的凋亡率及SA-β-Gal染色阳性率，增加细胞周期S期的比例，提高衰老大鼠胸腺细胞对刀豆蛋白A的增殖反应能力，胸腺皮/髓质比例与胸腺指数，使细胞因子的分泌量显著提高，并能明显降低其衰老相关蛋白的表达。
　　结论:
　　1.D-半乳糖能够诱导大鼠衰老，并诱导胸腺形态与功能衰退。
　　2.人参皂苷Rg1能拮抗D-半乳糖诱导的大鼠胸腺衰退，提高胸腺细胞功能，其机制可能与降低衰老相关蛋白的表达有关。
　　第二篇:人参皂苷Rg1联合阿糖胞苷对白血病细胞KG1α凋亡的影响
　　目的:探讨人参皂苷 Rg1联合阿糖胞苷对人白血病KG1ɑ细胞的增殖抑制作用与相关机理。
　　方法:CCK-8法检测不同处理方式与不同处理时间对KG1ɑ细胞的增殖抑制影响，免疫荧光检测不同处理方式作用细胞48、72h对细胞自噬及凋亡的影响，流式细胞术检测凋亡、坏死及自噬发生比例，β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测药物诱导细胞衰老，Western Blotting检测Atg-7、Atg-12和Beclin-1自噬相关蛋白的表达。
　　结果:阿糖胞苷对白血病KG1ɑ细胞增殖抑制呈明显的浓度梯度及时间依赖性，人参皂苷Rg1在8-16μg/ml范围内处理KG1ɑ细胞48h对其抑制效果最佳，人参皂苷Rg1联合阿糖胞苷作用能显著增加对KG1ɑ的细胞细胞毒性，联合用药作用细胞48h后，流式和免疫荧光结果提示，无论细胞自噬，凋亡，坏死还是衰老均没有发生明显的增高，但作用72h时细胞凋亡比例显著增加。
　　结论:8μg/ml的Rg1可以显著提高阿糖胞苷的细胞毒性，推测其可能机制与联合用药后能诱导KG1ɑ细胞的凋亡有关。

目录

封面

目录

符号说明

第一篇人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响

摘要

ABSTRACT

前言

1材料与方法

1.1实验动物

1.2主要药品与试剂

1.3主要仪器设备

1.4方法

1.6统计学分析

2.结果

2.1 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺指数与组织形态学的影响

2.2 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺细胞增殖的影响

2.3 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺细胞凋亡的影响

2.4 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺细胞细胞周期的影响

2.5 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺细胞SA-β-Gal染色的影响

2.6 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺细胞分泌细胞因子水平的影响

2.7 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺细胞表达P21、P53、RB蛋白的影响

3.讨论

4.结论

参考文献

第二篇人参皂苷Rg1联合阿糖胞苷对白血病细胞KG1α凋亡的影响

摘要

Absract

前言

1材料与方法

1.1 KG1α细胞株和L02肝细胞株

1.2主要药品与试剂

1.3实验方法

1.5统计学分析

2. 结果

2.1 阿糖胞苷与人参皂苷Rg1单独或联合用药对KG1α细胞的半数抑制浓度

2.2 联合用药对KG1α细胞自噬的影响

2.3 联合用药对KG1α细胞周期的影响

2.4 联合用药对KG1α细胞衰老的影响

2.5 联合用药对KG1α细胞凋亡的影响

2.6 联合用药对细胞凋亡及DNA损伤修复蛋白的表达

2.7 联合用药对细胞DNA损伤蛋白的表达

2.8 ATM抑制剂KU55933对联合用药造成的细胞凋亡及周期的影响

2.9 ATM激活剂氯喹二磷酸盐对联合用药造成的细胞凋亡的的影响

2.10 联合用药对人脐带血单个核细胞形成CFU-Mix能力的影响

2.11 联合用药对人肝细胞株L02增殖能力的影响

讨论

4.结论

参考文献

文献综述:免疫系统衰老及其相关的细胞信号转导

致谢

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