ATF4重组慢病毒对成骨和软骨细胞增殖凋亡的影响及PGRN-/-小鼠骨损伤愈合的初步研究

摘要

目的:构建人的活性转录因子4(ATF4)基因慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus)，探讨ATF4基因慢病毒修饰对成骨和软骨细胞增殖凋亡的影响；同时对PGRN-/-小鼠骨损伤愈合进行初步研究。
　　方法:将带有目的基因ATF4的慢病毒载体质粒pWPT-GFP-ATF4与慢病毒包装骨架质粒pSPAX2、pMD2G共同转染293T细胞中，包装成ATF4慢病毒(LV-ATF4)；培养C2C12细胞，采用BMP2诱导其向成骨细胞分化，观察LV-ATF4感染对细胞增殖和凋亡的影响；将C3H10细胞进行高密度微团培养，采用BMP2诱导其向软骨细胞分化，分别在BMP2诱导不同时间阶段，检测LV-ATF4对软骨细胞分化中增殖凋亡的影响；手术建立小鼠骨折和骨缺损模型，分析PGRN-/-小鼠与野生型小鼠骨损伤后愈合状况及ER Stress相关分子的表达变化。
　　结果:成功构建和包装滴度为1×108efu/mL的ATF4重组慢病毒；在BMP2诱导C2C12向成骨细胞分化过程中，感染LV-ATF4能加速细胞的凋亡，抑制细胞增殖和分化；在BMP2诱导C3H10软骨细胞分化过程中，感染LV-ATF4促进细胞的凋亡；成功建立野生型小鼠与PGRN-/-小鼠的骨折和骨缺损模型，与野生型小鼠相比，PGRN-/-小鼠骨损伤后愈合程度下降，ER stress相关分子表达下降。
　　结论:ATF4基因过表达可以促进BMP2诱导C2C12成骨细胞分化过程中细胞的凋亡、抑制细胞增殖和分化；同时促进BMP2诱导C3H10软骨细胞分化过程中细胞的凋亡；PGRN可能参与骨损伤后的愈合与骨再生过程。

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中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 LV-ATF4慢病毒构建与包装

1材料与方法

2 结果

3 小结

第二部分：人ATF4基因慢病毒修饰对成骨细胞分化中增殖凋亡的影响

1 材料与方法

2结果

3小结

第三部分：人ATF4基因慢病毒修饰对软骨细胞分化中增殖凋亡的影响

1材料与方法

2 结果

3小结

第四部分 PGRN-/-小鼠骨损伤愈合的初步研究

1 材料与方法

2 结果

3 小结

全文总结

参考文献

文献综述: 内质网应激和干细胞骨向分化研究进展

致谢

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