焦脱镁叶绿酸-a甲酯介导的光动力对人骨肉瘤MG63细胞凋亡影响的研究

摘要

目的：
　　探讨焦脱镁叶绿酸-a甲酯（pyropheophorbide-a methyl ester，MPPa）介导的光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响及其作用机制
　　方法：
　　取对数生长期人骨肉瘤 MG63细胞分为4组，分别为空白对照组（对照组）、单纯 MPPa药物组（MPPa组）、单纯光照组（LED组）以及 MPPa-PDT实验组（MPPa-PDT组）。MPPa-PDT组和 MPPa组于避光条件下加入 MPPa（0.75μmol/L），对照组及 LED组加入等量完全培养基；避光孵育20 h后，LED组及 MPPa-PDT组细胞接受集成 LED特种光源照射120 s（剂量为4.8 J/cm2）。光照结束后，于避光条件下继续培养，倒置相差显微镜观察细胞形态变化，透射电镜观察内质网形态变化，Hoechst33258染色观察细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内钙离子水平，Western blot检测 p-PERK、内质网源性转录因子（C/EBP homologous protein，CHOP）、活化半胱氨酸蛋白酶12（cleaved-Caspase-12）表达水平。
　　结果：
　　MPPa-PDT组倒置相差显微镜下见细胞明显回缩变圆；Hoechst33258染色示细胞核固缩、碎裂等典型凋亡形态学改变；流式细胞术检测细胞凋亡率为48.76%±3.54%，明显高于对照组5.04%±0.41%、MPPa组5.33%±0.38%及 LED组6.48%±0.46（P＜0.05）；细胞内钙离子水平为485.29±58.77，显著高于对照组（97.24±4.77）、MPPa组（97.95±6.30）、LED组(101.17±5.26)（P＜0.05）；透射电镜下见细胞内质网明显肿胀；Western blot检测示 p-PERK、CHOP、cleaved-Caspase-12相对表达量分别于培养1、3、6 h后明显高于其他3组（P＜0.05）。对照组、MPPa组及 LED组细胞无显著凋亡形态改变和内质网形态改变，上述检测指标组间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　MPPa-PDT可诱导人骨肉瘤MG63细胞发生凋亡，且内质网应激反应参与了 MPPa-PDT诱导细胞凋亡的过程。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料与方法

1.1细胞株

1.2主要试剂

1.3主要仪器

1.4主要试剂的配制

1.5细胞培养

1.6实验分组及处理

1.7细胞形态学及细胞凋亡观察

1.8流式细胞术检测

1.9透射电镜观察

1.10细胞内钙离子水平检测

1.11 Western blot分析

1.12统计学分析

2结果

2.1细胞形态学及细胞凋亡观察

2.2流式细胞术检测

2.3透射电镜观察

2.4 细胞内钙离子水平检测

2.5 Western blot 检测

3讨论

4结论

参考文献

附插图

文献综述:内质网应激与肿瘤治疗

致谢

攻读硕士期间的科研情况简介