钙视网膜蛋白在肠神经元异常疾病肠壁中的表达及临床意义

摘要

[目的]
　　 肠神经元异常疾病(neuronal intestinal malformations,NIM)指肠神经元发育及分布异常的疾病,主要包括先天性巨结肠和先天性巨结肠类缘病。先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)又称先天性肠神经节细胞缺乏症(aganglionosis,AG),是一种以肠管远端肠壁内神经节细胞完全缺如为特征的消化道畸形;巨结肠类缘病(Hirschsprung's disease allied disorder,HAD)为临床症状、X线表现与HD相似,但病理改变介于HD(肠壁内神经节细胞缺如)和正常人(肠壁内神经节细胞正常)之间的一类疾病,包括神经节细胞减少症(hypoaganglionosis)、神经节细胞未成熟症(immaturity of ganglia)、肠神经元性发育不良(intestinalneuronal dysplasis,IND)、神经元性发育不全(hypogenesis)四种常见的类型。临床上HD与HAD之间及不同类型HAD之间的治疗方法不完全相同,治疗效果也存在差异。钙视网膜蛋白(Calretinin,CR)是一种广泛分布于中枢和外周神经系统神经节细胞内的钙连接蛋白,在正常肠黏膜下神经丛和肌间神经丛中广泛存在。CR主要参与细胞内钙离子的循环过程以及与钙离子有关的神经信号传递过程。目前HD常规的病理诊断方法是对术后结肠标本的石蜡切片进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色并在光镜下观察肠壁内有无神经节细胞,该方法诊断HD基本可靠,但是诊断HAD及区分不同类型的HAD有一定难度。本研究利用在HE染色的基础上对HD和HAD病变肠管进行CR免疫组织化学染色,光镜下观察CR在不同疾病不同肠段的表达并比较其差异,分析差异的产生与HD及HAD发病机制之间的关系,探讨CR作为一种诊断并鉴别HD与HAD方法的可行性及优越性,进而指导临床治疗。
　　 [方法]
　　 本课题对42例行巨结肠根治术患儿术后病变肠段肠壁标本的石蜡切片行常规HE染色,光镜下观察肠壁神经节细胞形态和数量的变化,区分HD与HAD;后对HD无神经节细胞段和正常肠段、HAD病变肠段和正常肠段标本切片进行CR免疫组织化学染色,在相同条件下照相后利用图象分析系统(ianage pro plus6.0)定量分析HD与HAD不同肠段部位CR的表达情况,并使用统计软件SPSS13.0比较HD无神经节细胞段与正常肠段之间、HAD病变肠段与正常肠段之间、HD无神经节细胞段与HAD病变肠段之间CR表达的差异。
　　 [结果]
　　 1.NIM分类:42例标本中HE染色后确定HD25例,HAD及可疑HAD共17例。对所有标本行CR免疫组织化学染色后,确定HD22例(52.4％),HAD20例(47.6%),其中肠神经元发育异常8例(19.0%),神经节细胞减少症6例(14.3%),神经节细胞未成熟症4例(9.5%),神经元发育不良2例(4.8%)。
　　 2.HD无神经节细胞段中CR的表达明显低于HD正常肠段,差别有统计学意义(P＜0.01)。
　　 3.HAD病变肠段中CR的表达与其正常肠段相近,差别无统计学意义(P＞0.05)。
　　 4.HD无神经节细胞段中CR的表达明显低于HAD病变肠段,差别有统计学意义(P＜0.01)。
　　 [结论]
　　 1.CR在HD无神经节细胞段表达较正常肠段明显下降,提示CR分布异常及钙离子代谢障碍可能与HD的发生有关。
　　 2.CR在HAD病变肠段及正常肠段的表达无明显差别,提示CR与HAD的发病无明显关系,HAD的发病机制可能与HD不同。
　　 3.CR免疫组织化学染色可作为一种诊断及鉴别HD与HAD的新方法。