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第1章 绪论
1.1引言
1.2食品中常用纳米材料与食品安全
1.2.1食品中常用纳米材料
1.2.2纳米材料与食品安全
1.3食品与纳米氧化锌
1.3.1纳米氧化锌与食品安全
1.3.2纳米氧化锌的毒性机制
1.4铁死亡（Ferroptosis）
1.4.1铁死亡和活性氧（ROS）
1.4.2铁死亡和脂质过氧化
1.4.3铁死亡和铁
1.4.4 p53通过调控 system Xc-/SAT1信号调节细胞铁死亡
1.5 立题依据
第2章 ZnO NPs破坏细胞氧化平衡诱发铁死亡的分子机制
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.4常用试剂配置方法
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养及处理
2.3.2细胞存活率实验
2.3.3乳酸脱氢酶活性（LDH）实验
2.3.4流式细胞术检测细胞凋亡
2.3.5 流式细胞术检测细胞坏死
2.3.6吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）染色法
2.3.7还原型谷胱甘肽(GSH)检测
2.3.8谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)检测
2.3.9活性氧（ROS）检测
2.3.10丙二醛（MDA）含量检测
2.3.11细胞全蛋白的提取
2.3.12 BCA法检测蛋白浓度
2.3.13 Western Blot实验
2.3.14 实时荧光定量PCR检测
2.3.15 siRNA转染
2.3.16 透射电镜（TEM）表征纳米氧化锌形态
2.3.17线粒体膜电位（JC-1）检测
2.3.18线粒体染色
2.3.19透射电镜（TEM）观察细胞超微结构
2.3.20 X射线衍射（XRD）表征纳米氧化锌的晶体结构
2.3.21统计分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 纳米氧化锌的形态学表征
2.4.2 纳米氧化锌对HUVECs毒性分析
2.4.3 纳米氧化锌通过氧化应激诱导HUVECs发生脂质过氧化
2.4.4 纳米氧化锌诱导HUVECs发生铁死亡
2.4.5 HUVECs可在Erastin作用下发生铁死亡
2.4.6 纳米氧化锌通过氧化应激诱导HUVECs发生线粒体损伤
2.4.7讨论
第3章 ZnO NPs通过Zn2+泄露诱导HUVECs铁紊乱介导细胞发生铁死亡机制分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验细胞株
3.3 实验方法
3.3.4流式细胞术检测细胞凋亡
3.3.5活性氧（ROS）检测
3.3.6纳米氧化锌荧光标记实验
3.3.7纳米氧化锌的离子释放实验
3.3.8细胞内总锌离子含量检测实验
3.3.9细胞内纳米氧化锌颗粒检测实验
3.3.10 细胞内纳米氧化锌颗粒与溶酶体共定位实验
3.3.11细胞内锌离子与溶酶体共定位实验
3.3.12细胞培养及处理
3.3.13统计分析
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 纳米氧化锌导致HUVECs内铁调节发生紊乱
3.4.2 纳米氧化锌诱导HUVECs内铁池中铁的增加
3.4.3铁螯合剂DFO缓解了纳米氧化锌对HUVECs的细胞毒性
3.4.4 HUVECs对纳米氧化锌的摄取分析
3.4.5纳米氧化锌导致HUVECs内锌离子含量的增加
3.4.6 纳米氧化锌和锌离子增加HUVECs内铁含量
3.4.7 锌离子参与了纳米氧化锌诱导的细胞铁死亡
3.4.8 纳米氧化锌诱导八种细胞内铁含量的增加
3.4.9 讨论
第4章 ZnO NPs和Zn2+通过p53共同介导HUVECs发生铁死亡的分子机制研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验细胞株
4.3 实验方法
4.3.1实时荧光定量PCR检测
4.3.2 Western Blot实验
4.3.3流式细胞术检测细胞凋亡
4.3.4活性氧（ROS）检测
4.3.5 siRNA转染
4.3.6 统计分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 纳米氧化锌通过p53介导HUVECs发生铁死亡
4.4.2 纳米氧化锌通过p53激活SAT1诱导HUVECs发生铁死亡
4.4.3纳米氧化锌通过p53调节system Xc-诱导HUVECs发生铁死亡
4.4.4锌离子参与了纳米氧化锌激活p53调节system Xc-和SAT1诱导HUVECs发生铁死亡
4.4.5 纳米氧化锌诱导p53激活导致细胞铁死亡与细胞凋亡之间发生crosstalk
4.4.6 讨论
第5章 全文总结
参考文献
致谢
作者攻读硕士学位期间发表科研成果
